| In vivo Mitophagy Monitoring in Caenorhabditis elegans to Determine Mitochondrial Homeostasis
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Author:
Date:
2017-04-05
[Abstract] Perturbation of mitochondrial function is a major hallmark of several pathological conditions and ageing, underlining the essential role of fine-tuned mitochondrial activity (Lopez-Otin et al., 2013). Mitochondrial selective autophagy, known as mitophagy, mediates the removal of dysfunctional and/or superfluous organelles, preserving cellular and organismal homeostasis (Palikaras and Tavernarakis, 2014; Pickrell and Youle, 2015; Scheibye-Knudsen et al., 2015). In this protocol, we describe a method for assessing mitophagy in the nematode Caenorhabditis elegans.
[摘要] 线粒体功能的扰动是几种病理状况和衰老的主要标志，强调了线粒体活性调控的重要作用（Lopez-Otin等，2013）。 线粒体选择性自噬，称为嗜中性细胞因子介导功能障碍和/或多余的细胞器的去除，保留细胞和有机体内稳态（Palikaras和Tavernarakis，2014; Pickrell和Youle，2015; Scheibye-Knudsen等，2015）。 在这个协议中，我们描述了一种评估线虫秀丽隐杆线虫线粒体的方法。
【背景】线粒体被认为是真核细胞的细胞动力，因为它们是通过氧化磷酸化（OXPHOS）和ATP生成的主要能量提供者。此外，它们在细胞稳态中的关键作用突出表现在它们对几种基本细胞过程（包括钙缓冲，代谢物合成和凋亡等）调节的贡献。线粒体功能的放松规律与几种病理状况（包括衰老和年龄相关的神经变性疾病）的发病有关（Vafai和Mootha，2012; Palikaras和Tavernarakis，2014）。因此，真核生物已经发展了几种复杂和高度专门化的分子途径来保护能量稳态（Pickrell和Youle，2015; Scheibye-Knudsen等，2015）。 Mitophagy是一种选择性类型的自噬，促进线粒体受损的消除，以及细胞调节线粒体内源物质和环境信号的主要降解途径（Palikaras等，2015; Schiavi et al。，2015; ...
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| Protein Synthesis Rate Assessment by Fluorescence Recovery after Photobleaching (FRAP)
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Author:
Date:
2017-03-05
[Abstract] Currently available biochemical methods cannot be applied to monitor protein synthesis in specific cells or tissues, in live specimens. Here, we describe a non-invasive method for monitoring protein synthesis in single cells or tissues with intrinsically different translation rates, in live Caenorhabditis elegans animals.
[摘要] 目前可用的生物化学方法不能用于监测活体标本中特定细胞或组织中的蛋白质合成。在这里，我们描述了在活的秀丽隐杆线虫动物中监测具有本质上不同的翻译速率的单个细胞或组织中的蛋白质合成的非侵入性方法。
背景 蛋白质合成的适当调节对于细胞稳态和生长至关重要。蛋白质合成的放松规律已经涉及到诸如癌症和衰老衰退的病理学（Bjornsti和Houghton，2004; Syntichaki等人，2007）。目前可用的用于测量一般蛋白质合成速率的生物化学方法包括代谢标记和多糖成像（Martin，1998; Rennie等人，1994）。这些方法的适用性受限于标签在整个动物或感兴趣组织中的摄取不足和不受控制或不平等的分布。此外，这些方法缺乏特异性，由于大部分样品的固有翻译速率的变异性，可能会掩盖特定细胞或感兴趣的组织的显着变化。在本协议中，我们描述了一种基于光漂白（FRAP）后的荧光恢复来监测线虫秀丽隐杆线虫的蛋白质合成速率的方法。实验方法是基于转基因动物感兴趣的细胞和组织中荧光蛋白的表达。然后通过用强大的光源照射细胞，组织或整个动物来对荧光进行光漂白。然后在感兴趣的细胞或组织中监测指示新蛋白质合成的荧光的恢复。
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| P-body and Stress Granule Quantification in Caenorhabditis elegans
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Author:
Date:
2017-01-20
[Abstract] Eukaryotic cells contain various types of cytoplasmic, non-membrane bound ribonucleoprotein (RNP) granules that consist of non-translating mRNAs and a versatile set of associated proteins. One prominent type of RNP granules is Processing bodies (P bodies), which majorly harbors translationally inactive mRNAs and an array of proteins mediating mRNA degradation, translational repression and cellular mRNA transport (Sheth and Parker, 2003). Another type of RNP granules, the stress granules (SGs), majorly contain mRNAs associated with translation initiation factors and are formed upon ...
[摘要] 真核细胞含有各种类型的细胞质，非膜结合的核糖核蛋白（RNP）颗粒，其由非翻译mRNA和多种相关蛋白组成。一种突出类型的RNP颗粒是加工体（P体），其主要包含翻译失活的mRNA和介导mRNA降解，翻译抑制和细胞mRNA运输的蛋白质阵列（Sheth和Parker，2003）。另一种类型的RNP颗粒，应激颗粒（SGs）主要含有与翻译起始因子相关的mRNA并且在应激诱导的翻译失速（Kedersha等人，2000和1999）中形成。从单细胞生物学研究中获得的多个证据支持了一种模型，其中P体和SG在细胞应激期间物理相互作用以将mRNA转运，转移，临时储存或折返到翻译中（Anderson和Kedersha，2008; Decker和Parker，2012）。 P体和/或SG的量化，分布和共定位是研究RNP颗粒的组成及其对基础细胞过程（如压力反应和翻译调节）的贡献的重要工具。在这个协议中，我们描述了一种量化线虫秀丽隐杆线虫体细胞中P体和SGs的方法。
背景 到目前为止，研究P体和SG的大多数方案是针对酵母或人类细胞系开发的（Buchan et al。，2010）。对多细胞生物体内的体细胞RNP颗粒的功能知之甚少。简单的模型生物体。线虫已广泛用于研究与P体和SG不同的种系特异性P颗粒，以及种系发育和功能的重要结构（Updike和Strome，2010）。虽然所提出的方法的原理可以应用于计数种系特异性P颗粒，但该方案集中于体细胞RNP颗粒的定量。几项研究已经确定了在C中通过miRNA途径的翻译失调的体细胞P体的保守功能。 ...
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