| Extraction and Activity of O-acetylserine(thiol)lyase (OASTL) from Microalga Chlorella sorokiniana
|
|
Author:
Date:
2017-06-20
[Abstract] O-acetylserine(thiol)lyase (OASTL) is an enzyme catalysing the reaction of inorganic sulphide with O-acetylserine to form the S-containing amino acid L-cysteine. Here we describe an improved protocol to evaluate the activity of this enzyme from the microalga Chlorella sorokiniana. It is a colorimetric assay based on the reaction between cysteine, the product of OASTL activity, and ninhydrin reagent, which forms a thiazolidine (Thz).
[摘要] O-乙酰丝氨酸（硫醇）裂解酶（OASTL）是催化无机硫化物与O-乙酰丝氨酸反应形成含S氨基酸L-半胱氨酸的酶。 在这里我们描述一个改进的方案来评估这种酶从微藻小球藻的活性。 它是基于半胱氨酸（OASTL活性的产物）和形成噻唑烷（Thz）的茚三酮试剂之间的反应的比色测定。
【背景】在古代，细菌，微藻和植物中，半胱氨酸（Cys）的合成代表了同化硫酸盐还原的决定性阶段（Hell和Wirtz，2008）。 Cys生物合成是硫同化的最后一步，由丝氨酸乙酰转移酶（SAT，EC 2.3.1.30）和O-乙酰丝氨酸（硫醇）裂解酶（OASTL，EC 4.2.99.8）催化的两个相互连接的反应进行（Salbitani等，2014 ; Carfagna等，2015）。
OASTLs催化O-乙酰丝氨酸（OAS）和硫化物之间的反应形成Cys和乙酸酯（图1）。
在血管植物中，OASTLs位于叶绿体，线粒体和胞质溶胶中，具有不同的Cys合成功能（Jost等，2000; Birke等，2013）。在微藻中，OASTLs主要在叶绿体中主要定位（Merchant et al。，2007; Bromke，2013）。然而，在小球藻Sorokiniana中，发现两种同种型，氯代和胞质OASTL，在S剥夺条件下（Carfagna等，2011）。
许多研究人员已经制定和修改了确定植物和细菌中OASTLs活性的方案（Gaitonde，1967; ...
|
|
|
| Sulforhodamine B (SRB) Assay in Cell Culture to Investigate Cell Proliferation
|
|
Author:
Date:
2016-11-05
[Abstract] The SRB assay has been used since its development in 1990 (Skehan et al., 1990) to inexpensively conduct various screening assays to investigate cytotoxicity in cell based studies (Vichai and Kirtikara, 2006). This method relies on the property of SRB, which binds stoichiometrically to proteins under mild acidic conditions and then can be extracted using basic conditions; thus, the amount of bound dye can be used as a proxy for cell mass, which can then be extrapolated to measure cell proliferation.
The protocol can be divided into four main steps: preparation of ...
[摘要] Limonium 已知有性和无融合生殖（通过种子的无性繁殖）繁殖模式。在这里，我们提出解剖协议为胚珠的发芽。使用微分干涉对比（DIC）显微镜。该协议允许更好地处理胚珠，并提供优于早期技术，特别是在较大胚珠的某些优势。这种方法还能够观察到完整胚珠中的减数分裂和胚囊发育，以及容易检测到区别性和无序性发育的事件。
[背景] 发生在胚珠发育期间，有必要细胞学检查胚珠。这项研究可以涉及显微镜观察石蜡或树脂包埋，切片材料或清除的器官。在D'Amato（1940; 1949）的先驱作品中公开了对性和无融合生殖物种中胚珠和胚囊发育的第一次细胞学研究。在这些作品中，花使用Karpechenko的方法固定，包埋在石蜡中，切片并用Heidenhain的铁苏木精染色，其染色质和染色体在细胞核中染色。使用这些方法的花芽切片可导致由于单个细胞的部分破坏结构完整性而具有差质量的制备物。更容易的选择是清除福尔马林：乙酸：乙醇固定的器官并用纯的Mayer's hemalum染色（Wallis，1957; Stelly等人，1984）。这种技术需要少得多的时间和劳动，特别是对于通常在卵巢中形成小胚珠的物种，这是 Limonium ...
|
|
|