| Ex vivo Culture Assay Using Human Hair Follicles to Study Circadian Characteristics
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Author:
Date:
2020-06-05
[Abstract] Ex vivo culture assays of biopsy specimens are advantageous for the experimental evaluation of human circadian characteristics. We developed a simple and non-invasive experimental evaluation method for monitoring the expression of circadian clock genes in an ex vivo culture assay using human hair follicles. This method imposes little burden on subjects. This assay is useful for validating correlations between circadian characteristics in hair follicles and intrinsic characteristics observed in physiological and behavioral studies. While they should be further validated, this ex ...
[摘要] [摘要] 活检标本的体外培养测定法有利于人体昼夜节律特征的实验评估。我们开发了一种简单而无创的实验评估方法，用于监测人发体外培养法中昼夜节律基因的表达follicles.This方法强加subjects.This测定法是用于验证昼夜CH之间的相关性有用的小负担在毛囊和固有特性在生理和行为studies.While观察aracteristics它们应该被进一步验证，该离体方法用于小的有用工具体内估计 昼夜节律特征。
[背景] 活的生物体表现出在生理和行为的昼夜节律由生物钟驱动（杨和Kay，2001）。该昼夜发条由转录的细胞自主性和时钟基因驱动的负反馈环路（邓拉普，1999 ）。在哺乳动物中，转录因子BMAL1和CLOCK 通过E-box元件激活时钟和与时钟相关的基因（例如Period （Per ）和Cryptochrome （Cry ））的转录.PER与有效的转录抑制剂CRY一起起作用负性调节这一复杂（里珀特织女，2002年）。在体内评估个体的内在节律特点在人类，要么以恒定的例行或强制去同步化协议，价格昂贵，耗力。因此，评估利用离体培养试验中要估计体内的昼夜节律特征可能具有重要的优势。例如，一些研究已经结束，n个外周细胞反映了个体的昼夜节律偏好，称为计时型（Brown 等人，2005； Hida 等人，2013 ...
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| Determination of the Glycolysis and Lipogenesis in Culture of Hepatocytes
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Author:
Date:
2016-11-05
[Abstract] Metabolic flux analyses are needed to provide insights into metabolic regulation that occurs in cells. The current protocol describes fast and reproducible methods for determining glycolysis and de novo lipogenesis of hepatocytes. Primary culture of hepatocytes is an ‘in vitro’ model useful to study liver glucose and lipid metabolism (Denechaud et al., 2016). The protocol is divided in 2 parts. Part I: Glycolysis experiment is assessed using the Seahorse extracellular flux (XF) analyser. Glycolysis is determined via the measurement of the extracellular acidification ...
[摘要] 需要代谢通量分析来提供细胞中发生的代谢调节的见解。目前的协议描述了确定糖酵解和肝细胞脂肪生成的快速和可重复的方法。肝细胞的原代培养是用于研究肝葡萄糖和脂质代谢的"体外"模型（Denechaud等人，2016）。协议分为2部分。第I部分：使用海马细胞外通量（XF）分析仪评估糖酵解实验。糖酵解通过测量培养基的细胞外酸化速率（ECAR）来确定，所述培养基主要来自丙酮酸中葡萄糖转化后乳酸的细胞排泄。第II部分：新生脂肪生成实验测定来自乙酸盐C 14+前体的甘油三酯（TG）中的放射性C 14+掺入。在2小时后，向培养基中补加乙酸盐，提取脂质，并在新合成的TG标记的定量之前通过TLC（薄层色谱）分离。
[背景] 有不同的方法来评估葡萄糖和脂质代谢：代谢物定量，酶活性和代谢组学...我们的协议聚焦于活细胞的代谢通量分析并且不需要代谢组学设施。海马细胞外通量（XF）分析仪，现在存在于很多机构，是通过确定培养基pH值间接测量活细胞间接糖酵解的强大工具。脂肪生成协议不需要大投资，是高度可重复的。也可以使用氚化水确定，其通过脂肪酸合酶引入新鲜合成的脂质中。
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