| Polysome Fractionation to Analyze mRNA Distribution Profiles
|
|
Author:
Date:
2017-02-05
[Abstract] Eukaryotic cells adapt to changes in external or internal signals by precisely modulating the expression of specific gene products. The expression of protein-coding genes is controlled at the transcriptional and post-transcriptional levels. Among the latter steps, the regulation of translation is particularly important in cellular processes that require rapid changes in protein expression patterns. The translational efficiency of mRNAs is altered by RNA-binding proteins (RBPs) and noncoding (nc)RNAs such as microRNAs (Panda et al., 2014a and 2014b; Abdelmohsen et al., 2014). ...
[摘要] 真核细胞通过精确调节特定基因产物的表达来适应外部或内部信号的变化。蛋白质编码基因的表达受到转录和转录后水平的控制。在后面的步骤中，翻译的调节在需要蛋白质表达模式快速变化的细胞过程中特别重要。 mRNA的翻译效率由RNA结合蛋白（RBP）和非编码（nc）RNA如微RNA（Panda等人，2014a和2014b; Abdelmohsen等人）改变2014）。调节选择性mRNA翻译的因素的影响是RNA生物学中的一个关键问题。多核糖体（多核糖体）分馏分析是评估核糖体与给定mRNA的关联的有效方法。它提供了关于该mRNA的翻译状态的有价值的信息，这取决于与它们相关联的核糖体的数目，并且鉴定未翻译的mRNA（Panda等人，2016）。与许多核糖体相关的mRNA形成大量的多核糖体，预计将被主动翻译，而与少数或没有核糖体相关的mRNA有可能翻译不佳。总之，多聚糖分馏分析允许直接测定整个转录组水平的翻译效率以及个体mRNA。
背景 ...
|
|
|
| Analysis of Phagosomal Antigen Degradation by Flow Organellocytometry
|
|
Author:
Date:
2016-11-20
[Abstract] Professional phagocytes internalize self and non-self particles by phagocytosis to initiate innate immune responses. After internalization, the formed phagosome matures through fusion and fission events with endosomes and lysosomes to obtain a more acidic, oxidative and hydrolytic environment for the degradation of its cargo. Interestingly, phagosome maturation kinetics differ between cell types and cell activation states. This protocol allows to quantify phagosome maturation kinetics on a single organelle level in different types of phagocytes using flow cytometry. Here, ovalbumin ...
[摘要] 专业吞噬细胞通过吞噬作用内化自身和非自身颗粒以启动先天免疫应答。内化后，形成的吞噬体通过与内体和溶酶体的融合和裂变事件成熟，以获得更酸性，氧化和水解的环境用于其货物的降解。有趣的是，吞噬体成熟动力学在细胞类型和细胞活化状态之间不同。该协议允许使用流式细胞术定量不同类型的吞噬细胞中单个细胞器水平上的吞噬体成熟动力学。在这里，卵白蛋白（OVA）耦合的颗粒用作吞噬作用模型系统在树突状细胞（DC），其通过吞噬内化。在不同的时间点之后，吞噬体成熟参数，例如OVA的吞噬体降解和溶酶体蛋白（例如LAMP-1）的获得，可以通过流式细胞器细胞计数以高度定量的方式同时测量。这些读出可以与其他吞噬体功能相关，例如抗原降解，在DC中的加工和负载。
[背景] ...
|
|
|