| Single Molecule RNA FISH in Arabidopsis Root Cells
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Author:
Date:
2017-04-20
[Abstract] Methods that allow the study of gene expression regulation are continually advancing. Here, we present an in situ hybridization protocol capable of detecting individual mRNA molecules in plant root cells, thus permitting the accurate quantification and localization of mRNA within fixed samples (Duncan et al., 2016; Rosa et al., 2016). This single molecule RNA fluorescence in situ hybridization (smFISH) uses multiple single-labelled oligonucleotide probes to bind target RNAs and generate diffraction-limited signals that can be detected using a wide-field ...
[摘要] 允许研究基因表达调控的方法不断前进。在这里，我们提出了一种能够检测植物根细胞中单个mRNA分子的原位杂交方案，从而允许mRNA在固定样品内的准确定量和定位（Duncan等人， ，2016; Rosa等人，2016）。这种单分子RNA荧光原位杂交（smFISH）使用多个单标记寡核苷酸探针结合靶RNA并产生可以使用宽场荧光显微镜检测的衍射限制信号。我们调整了该方法的最新版本，该方法使用48个荧光标记的DNA寡核苷酸（20个）与每个转录物的不同部分杂交（Raj等人，2008）。这种方法简单易行，具有很好的应用于任何遗传背景的优点。
虽然已经开发了单分子FISH来定量测量培养细胞，组织切片和整体无脊椎动物生物体的单细胞水平的mRNA，但该方法未被优化用于植物中的单细胞。由于植物组织的内源性自发荧光，植物中的荧光成像是相当有挑战性的。在这里，我们报告一种检测植物中单RNA分子的方法。我们描述在固定的拟南芥根瘤胃细胞内的单一转录物的检测和自动计数。该方法产生隔离的单元和单细胞层，其与红色和远红色染料一起使用可以最大化限制背景噪声的信噪比。
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| Various Modes of Spinal Cord Injury to Study Regeneration in Adult Zebrafish
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Author:
Date:
2016-12-05
[Abstract] Spinal cord injury (SCI) in mammals leads to failure of both sensory and motor functions, due to lack of axonal regrowth below the level of injury as well as inability to replace lost neural cells and to stimulate neurogenesis. In contrast, fish and amphibians are capable of regenerating a variety of their organs like limb/fin, jaw, heart and various parts of the central nervous system (CNS). Zebrafish embryo and adult has become a very popular model to study developmental biology, cell biology and regeneration for various reasons. Adult zebrafish, one of the most important vertebrate models ...
[摘要] 哺乳动物的脊髓损伤（SCI）导致感觉和运动功能的失败，这是由于缺乏低于损伤水平的轴突再生以及不能代替失去的神经细胞和刺激神经发生。相比之下，鱼和两栖动物能够再生各种器官，如肢体/鳍，下巴，心脏和中枢神经系统（CNS）的各个部分。斑马鱼胚胎和成人已经成为一个非常受欢迎的模型，研究发育生物学，细胞生物学和再生由于各种原因。成年斑马鱼是研究再生的最重要的脊椎动物模型之一，可以再生许多身体部位，如鳍，下巴，心脏和CNS。在本文中，我们提供如何在成年鱼脊髓造成不同的损伤方式的信息。目前，哺乳动物SCI的重点是使用挤压和挫伤损伤。为了产生与哺乳动物损伤模式相当的实体，我们已经在成年斑马鱼中引入了粉碎模型以及完全横断损伤，其也被认为是研究轴突再生的有价值的模型。在这里，我们提供高度可重复的手术程序的完整描述，包括一些有代表性的结果。此协议已经从我们以前的出版物， viz 改编。简而言之，我们描述了两种不同的损伤模式，挤压和完全横切，并证实了造成的结果
关键字：脊髓，斑马鱼，挤压伤，横切损伤，再生
[背景] 对哺乳动物脊髓的任何损伤导致瘫痪和功能丧失的毁灭性后果。与哺乳动物，斑马鱼绳的损伤反应是相当不同，导致线的修复和再生，然后功能恢复。已经使用多种损伤方案来研究脊髓损伤和下脊椎动物中的功能恢复（Holtzer 1956; ...
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