| Microbial Mutagenicity Assay: Ames Test
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Author:
Date:
2018-03-20
[Abstract] The Microbial mutagenicity Ames test is a bacterial bioassay accomplished in vitro to evaluate the mutagenicity of various environmental carcinogens and toxins. While Ames test is used to identify the revert mutations which are present in strains, it can also be used to detect the mutagenicity of environmental samples such as drugs, dyes, reagents, cosmetics, waste water, pesticides and other substances which are easily solubilized in a liquid suspension. We present the protocol for conducting Ames test in the laboratory.
[摘要] 微生物致突变性艾姆斯试验是一种细菌生物测定法，用于体外评估各种环境致癌物和毒素的致突变性。 虽然艾姆斯试验可用于鉴定菌株中存在的回复突变，但它也可用于检测环境样品如药物，染料，试剂，化妆品，废水，农药和易溶于水的其他物质的致突变性 液体悬浮液。 我们提供在实验室进行艾姆斯测试的协议。
【背景】微生物艾姆斯试验是一种简单，快速和强大的细菌试验，由不同的菌株和鼠伤寒沙门氏菌/ E的应用组成。用于确定致突变潜力（Levin等人，1982; Gupta等人，2009）。 1975年，艾姆斯和他的追随者对传统的艾姆斯检测方案进行了标准化，并于20世纪80年代进行了再次评估（Maron and Ames，1983）。替换已有突变的新突变的诱导允许恢复基因功能。新形成的突变细胞允许在没有组氨酸的情况下生长并形成菌落，因此该测试也被称为“逆转测定法”（Ames，1971）。虽然传统的艾姆斯测试对于初始监测致突变化合物来说非常费力且费时，但是通过使其更便利，液体悬浮液的小型化显着地影响了可用性。标准剂量（2μl，5μl，10μl，50μl和100μl）用于评估从低浓度到高浓度的致突变性（Hayes，1982）。小鼠肝脏已被用作制备匀浆9,000xg（S9肝脏级分）的组织，而在 ...
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| Expression and Purification of a Mammalian P2X7 Receptor from Sf9 Insect Cells
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Author:
Date:
2017-09-05
[Abstract] The P2X7 receptor is an extracellular ATP-gated ion channel found only in eukaryotes (Bartlett et al., 2014). Due to its unique properties among P2X receptors, such as formation of a large conductance pore, the P2X7 receptor has been implicated in devastating diseases like chronic pain (North and Jarvis, 2013). However, mechanisms underlying the P2X7 specific properties remain poorly understood, partly because purification of this eukaryotic membrane protein has been challenging. Here we describe a detailed protocol for expressing and purifying a mammalian P2X7 receptor using an ...
[摘要] P2X7受体是仅在真核生物中发现的胞外ATP门控离子通道（Bartlett等，2014）。由于其P2X受体之间的独特性质，例如大电导孔的形成，P2X7受体已经涉及破坏性疾病如慢性疼痛（North和Jarvis，2013）。然而，P2X7特异性属性的机制仍然知之甚少，部分原因是纯化这种真核膜蛋白是一个挑战。在这里，我们描述了使用昆虫细胞 - 杆状病毒系统表达和纯化哺乳动物P2X7受体的详细方案。 P2X7受体在作为GFP融合蛋白的Sf9昆虫细胞中表达，并用含有Triton X-100洗涤剂的缓冲液溶解。然后使用Strep-Tactin亲和层析在含有十二烷基麦芽糖苷的缓冲液中纯化P2X7-GFP融合蛋白。在通过凝血酶酶切割连接的GFP和Strep-标签后，使用大小排阻色谱分离P2X7受体。该方法通常从6L的Sf9培养物产生约2mg的纯化蛋白质。纯化的蛋白质可以用含有15％甘油的缓冲液在4℃下储存至少2个月，并用于各种功能和结构研究（Karasawa和Kawate，2016）。
【背景】P2X7受体是嘌呤能P2X受体家族的七种亚型之一，并且是广泛疾病如神经退行性疾病，癫痫和神经性疼痛的有希望的新型药物靶点（North和Jarvis，2013; Bhattacharya和Biber， ...
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| Primary Culture System for Germ Cells from Caenorhabditis elegans Tumorous Germline Mutants
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Author:
Date:
2017-08-05
[Abstract] The Caenorhabditis elegans germ line is an important model system for the study of germ stem cells. Wild-type C. elegans germ cells are syncytial and therefore cannot be isolated in in vitro cultures. In contrast, the germ cells from tumorous mutants can be fully cellularized and isolated intact from the mutant animals. Here we describe a detailed protocol for the isolation of germ cells from tumorous mutants that allows the germ cells to be maintained for extended periods in an in vitro primary culture. This protocol has been adapted from Chaudhari et al. ...
[摘要] 秀丽隐杆线虫种系是胚芽干细胞研究的重要模型系统。 野生型C。 线虫生殖细胞是合胞体，因此不能在体外培养中分离。 相比之下，来自肿瘤突变体的生殖细胞可以完全被细胞化并从突变动物中完整分离。 在这里，我们描述了从肿瘤突变体中分离生殖细胞的详细方案，其允许生殖细胞在体外原代培养中长时间维持。 该协议已从2016年Chaudhari等人改编。
【背景】秀丽生殖细胞在位于两个性腺臂的远端区域的两个成体干细胞龛中产生（Hansen和Schedl，2013; Kimble和Seidel，2013）。在野生型雌雄同体中，有丝分裂生殖细胞仅限于性腺臂的远端，干细胞生态位。野生型生殖细胞是合胞体，并且包含延伸通过性腺臂中心区域的共同细胞质的开口。 ℃。线虫肿瘤种系突变体在整个性腺中增加了生殖细胞的有丝分裂增殖。我们发现肿瘤种系突变体通常具有完整的细胞生殖细胞，其含有完整的质膜（Chaudhari等人，2016）。这种细胞化允许生殖细胞的分离及其在培养中的维持。该方案描述了分离和维持培养物中肿瘤突变体的生殖细胞的方法学和组织培养基。虽然已经描述了用于C的主要培养物的培养基。 elegans 胚胎和幼虫细胞（Strange等人，2007; Zhang和Kuhn，2013），生殖细胞在这种培养基中不能存活（Chaudhari等人。 ...
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