| Nuclear/Cytoplasmic Fractionation of Proteins from Caenorhabditis elegans
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Author:
Date:
2018-10-20
[Abstract] C. elegans is widely used to investigate biological processes related to health and disease. To study protein localization, fluorescently-tagged proteins can be used in vivo or immunohistochemistry can be performed in whole worms. Here, we describe a technique to localize a protein of interest at a subcellular level in C. elegans lysates, which can give insight into the location, function and/or toxicity of proteins.
[摘要] ℃。 线虫>广泛用于研究与健康和疾病相关的生物过程。 为了研究蛋白质定位，荧光标记的蛋白质可用于体内>或免疫组织化学可在整个蠕虫中进行。 在这里，我们描述了一种在 C中亚细胞水平定位感兴趣的蛋白质的技术。 线虫>裂解物，可以洞察蛋白质的位置，功能和/或毒性。
【背景】亚细胞分级已用于不同的模式生物中以鉴定和研究细胞核，细胞膜和细胞质中的蛋白质功能。 例如，当聚集倾向蛋白定位于细胞核或细胞质中时，它们的毒性可能更大（Kontopoulos et al。>，2006; Barmada et al。>，2010）。 在这里，我们提供了一个协议（改编自Chen et al。>，2000和La Rocca et al。>，2007）来定位的细胞核和细胞质组分中的特定蛋白质。>℃。线虫>。
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| Enzymatic Assays and Enzyme Histochemistry of Tuta absoluta Feeding on Tomato Leaves
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Author:
Date:
2018-09-05
[Abstract] Enzymes play a key role in insect-plant relationships. For a better understanding of these interactions, we analyzed Tuta absoluta digestive enzymes. Here, we describe a detailed protocol for the detection of trypsin and papain-like enzymes in Tuta absoluta larvae by enzyme histochemistry. This assay uses frozen and unfixed samples to avoid the loss of enzymatic activity. We also describe a protocol for the quantification of trypsin and papain-like enzymes in the larvae of Tuta absoluta at different developmental instars.
[摘要] 酶在昆虫植物关系中起着关键作用。 为了更好地理解这些相互作用，我们分析了 Tuta absoluta 消化酶。 在这里，我们描述了通过酶组织化学检测 Tuta absoluta 幼虫中的胰蛋白酶和木瓜蛋白酶样酶的详细方案。 该测定使用冷冻和未固定的样品以避免酶活性的丧失。 我们还描述了在不同发育期的 Tuta absoluta 幼虫中量化胰蛋白酶和木瓜蛋白酶样酶的方案。
【背景】植物和昆虫共存了数百万年，并进化出一系列相互作用，影响不同水平的生物。昆虫设法发展不同的生理和形态适应，以克服植物防御机制。因此，更好地了解其重要功能将有助于其有针对性的控制。昆虫的不同生理功能依赖于酶：消化，呼吸，循环，肌肉，神经，生殖和内分泌。几种酶参与消化。蛋白酶如胰蛋白酶，胰凝乳蛋白酶，胃蛋白酶或羧肽酶是蛋白质消化的原因，蛋白质消化是昆虫的氨基酸来源。因此，消化蛋白酶抑制剂已被成功用于提高植物对昆虫的抗性（Smigocki et al。，2013; Quilis et al。，2014; Hamza et al ...
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| Analysis of Xyloglucan Composition in Arabidopsis Leaves
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Author:
Date:
2017-10-05
[Abstract] Xyloglucan is one of the main components of the primary cell wall in most species of plants. This protocol describes a method to analyze the composition of the enzyme-accessible and enzyme-inaccessible fractions of xyloglucan in the model species Arabidopsis thaliana. It is based on digestion with an endoglucanase that attacks unsubstituted glucose residues in the backbone. The identities and relative amounts of released xyloglucan fragments are then determined using MALDI-TOF mass spectrometry.
[摘要] 木葡聚糖是大多数植物种类中主要细胞壁的主要成分之一。 该方案描述了一种分析拟南芥拟南芥中木葡聚糖的可酶酶和不可酶酶级分的组成的方法。 它是基于内切葡聚糖酶的消化，其攻击骨架中的未取代的葡萄糖残基。 然后使用MALDI-TOF质谱法测定释放的木葡聚糖片段的身份和相对量。
【背景】在许多开花植物中，木葡聚糖是主要细胞壁的主要成分，其在生长调节中起重要作用。顺序提取方案提供了分离不同木葡聚糖结构域的方法（Pauly et al。，1999）。一些木葡聚糖似乎被捕获在纤维素微原纤维内，而另一部分通过氢键结合到它们的表面。木葡聚糖的其余部分（可能大多数）占据了微原纤维之间的距离（Park和Cosgrove，2015）。可以通过细胞壁材料的直接内切葡聚糖酶消化来提取部分后来的木葡聚糖。然后可以通过碱处理释放大部分剩余的木葡聚糖。缺乏木葡聚糖外切糖苷酶的突变体的研究表明，这些酶与葡聚糖内切葡糖基酶/水解酶一起主要作用于酶易接近部分（Sampedro等人，2010;Günl和Pauly，2011;Günl ，2011; Sampedro等人，2012; Sampedro等人，2017）。消化拟南芥木葡聚糖与内切葡聚糖酶攻击未经取代的葡萄糖残基导致三个和四个葡萄糖亚基的混合物，可以通过MALDI-TOF质谱快速和容易地分析（Lerouxel等人， ...
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