| Polyamine and Paraquat Transport Assays in Arabidopsis Seedling and Callus
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Author:
Date:
2017-08-05
[Abstract] Polyamines (PAs) are polycationic compounds found in all living organisms and play crucial roles in growth and survival. We here show the ‘Polyamine and paraquat (PQ) transport assay’ protocol, which can be used to examine the uptake activity of PA/PQ transporters. We have used this protocol to demonstrate that PUT3 in Arabidopsis is a polyamine transporter and is able to take up spermidine and its analog paraquat.
[摘要] 多胺（PA）是在所有生物体中发现的聚阳离子化合物，在生长和生存中起关键作用。 我们在这里展示了“多胺和百草枯（PQ）运输测定”方案，可用于检查PA / PQ转运蛋白的摄取活性。 我们已经使用该协议来证明拟南芥中的PUT3是多胺转运蛋白，并且能够吸收亚精胺及其类似百草枯。
【背景】PA通过与阴离子大分子如DNA，RNA和蛋白质的功能相互作用和调节而参与基因调控。 在活细胞中，必须调节PA的含量以维持细胞止血。 在高等植物中，三种主要的多胺，腐胺（Put），亚精胺（Spd）和精胺（Spm）以游离形式或缀合形式与其他分子一起存在（Gill和Tuteja，2010）。 在酵母中，鉴定了四种质膜多胺转运体DUR3，SAM3，GAP1和AGP2（Uemura等人，2007）。 在拟南芥中，鉴定了5种推定的多胺摄取转运蛋白（PUT1-PUT5），并且PUT1-3已被实验验证为多胺转运蛋白（Mulangi等人，2012; Li et al，2013）。 我们以下所述的方案成功证实了PUT3是多胺和百草枯的流入转运蛋白，并且在Put3突变体（Shen等人，2016）中PQ /Spd吸收受损）。
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| In vivo Mitophagy Monitoring in Caenorhabditis elegans to Determine Mitochondrial Homeostasis
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Author:
Date:
2017-04-05
[Abstract] Perturbation of mitochondrial function is a major hallmark of several pathological conditions and ageing, underlining the essential role of fine-tuned mitochondrial activity (Lopez-Otin et al., 2013). Mitochondrial selective autophagy, known as mitophagy, mediates the removal of dysfunctional and/or superfluous organelles, preserving cellular and organismal homeostasis (Palikaras and Tavernarakis, 2014; Pickrell and Youle, 2015; Scheibye-Knudsen et al., 2015). In this protocol, we describe a method for assessing mitophagy in the nematode Caenorhabditis elegans.
[摘要] 线粒体功能的扰动是几种病理状况和衰老的主要标志，强调了线粒体活性调控的重要作用（Lopez-Otin等，2013）。 线粒体选择性自噬，称为嗜中性细胞因子介导功能障碍和/或多余的细胞器的去除，保留细胞和有机体内稳态（Palikaras和Tavernarakis，2014; Pickrell和Youle，2015; Scheibye-Knudsen等，2015）。 在这个协议中，我们描述了一种评估线虫秀丽隐杆线虫线粒体的方法。
【背景】线粒体被认为是真核细胞的细胞动力，因为它们是通过氧化磷酸化（OXPHOS）和ATP生成的主要能量提供者。此外，它们在细胞稳态中的关键作用突出表现在它们对几种基本细胞过程（包括钙缓冲，代谢物合成和凋亡等）调节的贡献。线粒体功能的放松规律与几种病理状况（包括衰老和年龄相关的神经变性疾病）的发病有关（Vafai和Mootha，2012; Palikaras和Tavernarakis，2014）。因此，真核生物已经发展了几种复杂和高度专门化的分子途径来保护能量稳态（Pickrell和Youle，2015; Scheibye-Knudsen等，2015）。 Mitophagy是一种选择性类型的自噬，促进线粒体受损的消除，以及细胞调节线粒体内源物质和环境信号的主要降解途径（Palikaras等，2015; Schiavi et al。，2015; ...
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| Measuring Oxidative Stress in Caenorhabditis elegans: Paraquat and Juglone Sensitivity Assays
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Author:
Date:
2017-01-05
[Abstract] Oxidative stress has been proposed to be one of the main causes of aging and has been implicated in the pathogenesis of many diseases. Sensitivity to oxidative stress can be measured by quantifying survival following exposure to a reactive oxygen species (ROS)-generating compound such as paraquat or juglone. Sensitivity to oxidative stress is a balance between basal levels of ROS, the ability to detoxify ROS, and the ability to repair ROS-mediated damage.
[摘要] 已经提出氧化应激是老化的主要原因之一，并且已经涉及许多疾病的发病机理。对氧化应激的敏感性可以通过量化暴露于活性氧（ROS） - 生成化合物如百草枯或胡桃酮后的存活来测量。对氧化应激的敏感性是ROS的基础水平，ROS解毒能力和修复ROS介导的损伤的能力之间的平衡。
背景 已经使用许多方法来测试秀丽隐杆线虫中的氧化应激的敏感性，包括接触百草枯，胡桃碱，t-BOOH，亚砷酸盐，H 2 O 2 O 2或高压氧（Keith等人，2014）。所有这些测定用于将蠕虫中的ROS水平提高到生存降低的程度。蠕虫暴露于（例如，超氧化物，过氧化氢），暴露速率（急性与慢性）和认为受影响最严重的亚细胞区域（ROS）的主要类型不同，百草枯主要在线粒体中增加超氧化物水平（Castello et al。，2007）。基于这些差异，特定的蠕虫菌株可能表现出增加的敏感性或在一个测定中增加的抗氧化应激，但在另一个测定中没有显示出差异。蠕虫菌株也可能在一个年龄对氧化应激敏感，但在不同的时间对该氧化应激的相同形式有抗性因此，为了获得对特定菌株对氧化应激敏感性的充分了解，有必要在不同时间点使用多种测定法。
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