| Bioorthogonal Labeling and Chemoselective Functionalization of Lung Extracellular Matrix
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Author:
Date:
2021-02-20
[Abstract] Decellularized extracellular matrix (ECM) biomaterials derived from native tissues and organs are widely used for tissue engineering and wound repair. To boost their regenerative potential, ECM biomaterials can be functionalized via the immobilization of bioactive molecules. To enable ECM functionalization in a chemoselective manner, we have recently reported an effective approach for labeling native organ ECM with the click chemistry-reactive azide ligand via physiologic post-translational glycosylation. Here, using the rat lung as a model, we provide a detailed protocol for in vivo and ex ...
[摘要] [摘要]源自天然组织和器官的脱细胞细胞外基质（ECM）生物材料被广泛用于组织工程和伤口修复。为了增强其再生潜力，可以通过固定生物活性分子来使ECM生物材料功能化。为了使ECM以化学选择性的方式实现功能化，我们最近报告了一种有效的方法，可通过生理学上的翻译后糖基化，用点击化学反应的叠氮化物配体标记天然器官ECM 。在此，使用大鼠肺为模型，我们提供一种用于详细方案在体内和离体代谢叠氮化物使用N- Azidoacetylgalactosamine-tetraacylated天然器官ECM的标记（AC 4GalNAz），以及用于脱细胞和标记表征的程序。我们的方法可以在体内三天内或离体器官培养期间的一天之内进行特异性而稳定的ECM标记。脱细胞后，所得的ECM标记保持稳定。通过我们的方法，ECM生物材料可以用所需的炔烃修饰的生物分子（例如生长因子和糖胺聚糖）进行功能化，以用于组织工程和再生应用。
关键字：细胞外基质，脱细胞，生物正交，化学选择性功能化，点击化学，肺
[背景]细胞外基质（ECM）是由特定组织或器官的非细胞成分组成的水合网络支架，在通过其所包含的生物活性成分（例如纤维蛋白，生长）支持住宅细胞的活动中起关键作用。因子和糖胺聚糖（GAG）（Theocharis et ...
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| Preparation of Cerebellum Granule Neurons from Mouse or Rat Pups and Evaluation of Clostridial Neurotoxin Activity and Their Inhibitors by Western Blot and Immunohistochemistry
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Date:
2018-07-05
[Abstract] Cerebellar Granule Neurons (CGN) from post-natal rodents have been widely used as a model to study neuronal development, physiology and pathology. CGN cultured in vitro maintain the same features displayed in vivo by mature cerebellar granule cells, including the development of a dense neuritic network, neuronal activity, neurotransmitter release and the expression of neuronal protein markers. Moreover, CGN represent a convenient model for the study of Clostridial Neurotoxins (CNT), most notably known as Tetanus and Botulinum neurotoxins, as they abundantly express both CNT ...
[摘要] 来自产后啮齿动物的小脑颗粒神经元（CGN）已被广泛用作研究神经元发育，生理学和病理学的模型。 CGN体外培养维持成熟小脑颗粒细胞在体内显示的相同特征，包括发育致密的神经炎网络，神经元活动，神经递质释放和神经元的表达 蛋白质标记。 此外，CGN代表了梭菌神经毒素（CNT）研究的便利模型，最着名的是破伤风和肉毒杆菌神经毒素，因为它们大量表达CNT受体和神经元内基质， ie ，可溶性N-乙基马来酰亚胺 - 敏感因子激活蛋白受体（SNARE蛋白）。 在这里，我们描述了从出生后大鼠/小鼠获得高纯度CGN培养物的方案和用CNT中毒的简便方法。 我们还说明了评估CNT活性及其抑制的方便方法。
【背景】梭菌神经毒素（CNT）的大家族由破伤风神经毒素（TeNT）和肉毒杆菌神经毒素（BoNT）的多种变体形成，它们分别是破伤风和肉毒中毒的神经麻痹毒素（Schiavo et al。，2000; Johnson和Montecucco，2008; Rossetto et al。，2014）。 TeNT，七种BoNT血清型（BoNT / A至/ G）及其许多亚型是金属蛋白酶，通过切割SNARE蛋白（可溶性N-乙基马来酰亚胺敏感因子激活蛋白受体），三种必需蛋白质来阻断神经递质的释放而引起神经麻痹。控制突触小泡与突触前质膜的融合（Rossetto et al。，2014; ...
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| In vitro AMPylation Assays Using Purified, Recombinant Proteins
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Date:
2017-07-20
[Abstract] Post-translational protein modifications (PTMs) orchestrate the activity of individual proteins and ensure their proper function. While modifications such as phosphorylation or glycosylation are well understood, more unusual modifications, including nitrosylation or AMPylation remain comparatively poorly characterized. Research on protein AMPylation–which refers to the covalent addition of an AMP moiety to the side chains of serine, threonine or tyrosine–has undergone a renaissance (Yarbrough et al., 2009; Engel et al., 2012; Ham et al., 2014; Woolery et al., ...
[摘要] 翻译后蛋白质修饰（PTM）协调各种蛋白质的活性并确保其功能正常。虽然诸如磷酸化或糖基化的修饰被很好地理解，但是更不寻常的修饰，包括亚硝基化或AMP化仍然比较差的表征。关于蛋白质AMP化的研究 - 其是将AMP部分共价加成到丝氨酸，苏氨酸或酪氨酸的侧链，已经经历了复兴（Yarbrough et al。，2009; Engel et al。 2012年; Ham等人，2014年; Woolery等人，2014年; Preissler等人，2015年; ; Sanyal等人，2015; Truttmann等人，2016; Truttmann等人，2017）。鉴定和表征含丝状（fic）结构域的AMPylases引起了对该PTM的新兴趣（Kinch等人，2009; Yarbrough等人，2009）。基于最近的体内和体外研究，我们现在知道分泌的细菌AMPylase共价连接AMP到Rho家族GTP酶的成员，而后生动物AMPylases修饰HSP70家族蛋白在细胞质和内质网（ER）（Itzen等人，2011; Hedberg和Itzen，2015; Truttmann和Ploegh，2017）。认为AMP化学将HSP70置于不能参与蛋白质重折叠反应的引发剂但瞬时失活的状态（Preissler等人，2015）。 ...
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