| Adhesion Assay for Murine Bone Marrow Hematopoietic Stem Cells
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Author:
Date:
2017-02-20
[Abstract] Hematopoietic stem cells (HSCs) are defined by their functional abilities to self-renew and to give rise to all mature blood and immune cell types throughout life. Most HSCs are retained in a non-motile quiescent state within a specialized protective microenvironment in the bone marrow (BM) termed the niche. HSCs are typically distinguished from other adult stem cells by their motility capacity. Movement of HSCs across the physical barrier of the marrow extracellular matrix and blood vessel endothelial cells is facilitated by suppression of adhesion interactions, which are essential to ...
[摘要] 造血干细胞（HSC）由其自我更新的功能定义，并在整个生命中产生所有成熟的血液和免疫细胞类型。大多数HSC在被称为利基的骨髓（BM）的专门的保护性微环境内保持在非运动性静止状态。 HSC通常通过其运动能力与其他成体干细胞区分开来。通过抑制粘附相互作用促进骨髓细胞外基质和血管内皮细胞的物理屏障的移动，这是保留在其BM细胞壁内保留的干细胞所必需的。重要的是，在临床移植后将HSC归巢到BM是重建消融BM的关键的第一步，就像血液恶性肿瘤治疗策略一样。归位过程结束于HSC的选择性访问和锚定到其在BM内的专门的位置。粘附分子是在干细胞移植的情况下增强归巢或减少BM保留以从匹配供体的血液中收集动员的HSC的靶标。在HSC上功能表达并参与其归巢和保留的主要粘附蛋白是整合素α4β1（非常晚的抗原-4; VLA4）。在该方案中，我们引入了针对表达VLA4的鼠骨髓干细胞优化的粘附测定。该测定法在分离表达VLA4的贴壁细胞后，通过流式细胞术与HSC富集细胞表面标记物定量粘附的HSC。
背景 HSCs主要保留在BM中，并通过与其微环境（niche）的粘合相互作用来调节。以这种方式，HSC保持在非运动性静止状态，保护它们免受DNA损伤代理（Boulais和Frenette，2015; Mendelson和Frenette，2014; ...
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| Phagocytosis Assay to Measure Uptake of Necroptotic Cancer Cells by BMDCs
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Author:
Date:
2016-11-05
[Abstract] This protocol is a flow cytometry-based method to measure the phagocytosis efficiency of necroptotic target cells by bone marrow-derived dendritic cells (BMDCs) in vitro (Aaes et al., 2016). The method is a slightly modified and updated version of the protocols used in previously published papers (Krysko et al., 2006; Brouckaert et al., 2004). In brief, the target cells are labeled with a CellTrackerTM dye before they are induced to undergo cell death. After a co-culture period of 2 h with BMDCs, the cells are immunostained with a dendritic cell ...
[摘要] 该方案是基于流式细胞术的方法，以测量骨髓来源的树突细胞（BMDCs）在体外的坏死性靶细胞的吞噬效率（Aaes等人 2016）。该方法是先前发表的论文中使用的方案的稍微修改和更新的版本（Krysko等人，2006; Brouckaert等人，2004）。简言之，在细胞被诱导经历细胞死亡之前，用CellTracker TM TM染料标记靶细胞。在用BMDCs共培养2小时后，用树突细胞标记物和死细胞标记物对细胞进行免疫染色，并使用流式细胞仪定量吞噬效率。该方案可以容易地用于经历除坏死作用以外的细胞死亡模式的靶细胞。
[背景] 研究BMDCs吞噬细胞摄取的坏死细胞是检测免疫原性细胞死亡模型的初步步骤（Obeid等人，2007）。有效摄取将允许吞噬细胞将抗原交叉呈递到白细胞，从而产生针对死的靶细胞的免疫反应。在该协议中，我们使用CellTracker TM sup TM染料。这种类型的染料在某些浓度下可能是有毒的，其可以根据使用的细胞类型而变化。因此，我们建议用户首先为使用的靶细胞找到最佳的染料浓度。最佳地，CellTracker TM 染料本身不应该诱导任何细胞死亡，而是应当标记靶细胞，使得它们容易与CD11c阳性BMDC分离。
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