| Isolation and Culture of Mouse Lung ILC2s
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Author:
Date:
2018-10-05
[Abstract] Group 2 Innate Lymphoid Cells (ILC2) play an important role in immune responses at barrier surfaces, notably in the lung during airway allergic inflammation or asthma. Several studies have described methods to isolate ILC2s from wild-type naive mice, most of them using cell sorting to obtain a pure population. Here, we describe in detail, a simple, efficient method for isolation and culture of lung mouse ILC2s. Lungs from Rag2-/- mice pretreated with IL-33 are collected and processed into single cell suspensions. Lymphoid cells are then recovered by density gradient ...
[摘要] 第2组先天性淋巴细胞（ILC2）在屏障表面，特别是在气道过敏性炎症或哮喘期间的肺中的免疫应答中起重要作用。一些研究已经描述了从野生型幼稚小鼠中分离ILC2的方法，其中大多数使用细胞分选来获得纯种群。在这里，我们详细描述了一种简单有效的肺小鼠ILC2分离和培养方法。收集用IL-33预处理的 Rag2 - / - 小鼠的肺并加工成单细胞悬浮液。然后通过密度梯度分离回收淋巴样细胞。通过耗尽谱系阳性细胞然后阳性选择CD45 + 细胞来选择Lin - CD45 + 细胞。将分离的细胞培养数天导致高度纯化的ILC2群体表达典型的细胞表面标志物（CD90.2，Sca1，CD25，CD127和IL-33R）。这些细胞可在培养物中扩增长达10天，并用于多种离体测定或体内过继转移实验。
【背景】第2组先天性淋巴细胞（ILC2）是组织驻留细胞，其在抗寄生虫先天免疫以及过敏性炎症的发展中起关键作用。它们通过产生大量的2型细胞因子IL-5和IL-13对上皮细胞衍生的细胞因子如白细胞介素-33（IL-33）起反应，后者又诱导嗜酸性粒细胞增多和粘液产生（Cayrol和Girard，2018）。为了更好地表征这些细胞的功能和调节，许多组通过荧光激活细胞分选（FACS）从野生型小鼠（WT）的肺中分选ILC2。由于稳定状态下肺中存在的ILC2数量较少，因此该方法导致纯化细胞的产量较低（每只小鼠1×10 ...
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| Enhancement of Mucus Production in Eukaryotic Cells and Quantification of Adherent Mucus by ELISA
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Author:
Date:
2018-06-20
[Abstract] The mucosal surfaces of the gastrointestinal, respiratory, reproductive, and urinary tracts, and the surface of the eye harbor a resident microflora that lives in symbiosis with their host and forms a complex ecosystem. The protection of the vulnerable epithelium is primarily achieved by mucins that form a gel-like structure adherent to the apical cell surface. This mucus layer constitutes a physical and chemical barrier between the microbial flora and the underlying epithelium. Mucus is critical to the maintenance of a homeostatic relationship between the microbiota and its host. Subtle ...
[摘要] 胃肠道，呼吸道，生殖道和泌尿道的粘膜表面以及眼睛表面都有一个居住的微生物群落，它们与宿主共生并形成一个复杂的生态系统。脆弱的上皮细胞的保护主要通过形成附着于顶端细胞表面的凝胶样结构的粘蛋白实现。该粘液层构成了微生物菌群和下层上皮之间的物理和化学屏障。粘液对维持微生物群与宿主之间的稳态关系至关重要。与这种动态互动的细微差异可能会对健康产生重大影响。本文中的方案描述了生长低粘液产生HT29和高粘液产生HT29-MTX-E12细胞的程序，维持细胞并通过ELISA将其用于粘液定量。此外，还介绍了如何评估分泌黏液的数量。该系统可用于研究粘液对抗细菌毒素的保护作用，例如测试不同培养条件对粘液产生的影响或分析分子通过粘液层的扩散。由于本方案中使用的ELISA可用于不同的物种和粘液蛋白，因此也可以使用其他细胞类型。
【背景】身体与外部环境的界面由粘膜表面形成。这些粘膜上皮组织可以在例如胃肠道，呼吸道，生殖道和尿道以及眼睛表面发现。由于它们暴露于外部环境中，许多微生物会聚集在这些组织中。因此，这些上皮细胞已经进化出多种防御机制来回应其易受微生物攻击的影响。许多防御性化合物被分泌到粘膜液中，包括粘蛋白，抗体，防御素，protegrin，聚集蛋白，cathelicidins，溶菌酶，组蛋白和一氧化氮（Kagnoff和Eckmann，1997，Lu等人，2002 ...
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| Quantification of Colibactin-associated Genotoxicity in HeLa Cells by In Cell Western (ICW) Using γ-H2AX as a Marker
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Author:
Date:
2018-03-20
[Abstract] The genotoxin colibactin is produced by several species of Enterobacteriaceae. This genotoxin induces DNA damage, cell cycle arrest, senescence and death in eukaryotic cells (Nougayrède et al., 2006; Taieb et al., 2016). Here we describe a method to quantify the genotoxicity of bacteria producing colibactin following a short infection of cultured mammalian cells with colibactin producing E. coli.
[摘要] 基因毒素colibactin由几种肠杆菌科产生。 该基因毒素在真核细胞中诱导DNA损伤，细胞周期停滞，衰老和死亡（Nougayrède等人，2006; Taieb等人，2016）。 在这里，我们描述了一种方法来量化生产colibactin的细菌的基因毒性，在短时间感染培养的哺乳动物细胞后，产生e colibactin。大肠杆菌。
【背景】基因毒素colibactin是由几种肠杆菌科产生的聚酮化合物非核糖体肽杂交化合物。由编码在54kb基因组基因座pks岛上的机器合成的这种毒素在真核细胞中诱导DNA损伤，细胞周期停滞，衰老和死亡（Nougayrède等人， 2006年; Taieb 等人，2016年）。大肠杆菌素的基因毒性活性取决于直接的宿主细胞 - 细菌相互作用，并且不能从培养物上清液，杀死的细菌或细菌裂解物而非生命细菌重演。可以通过量化巨细胞病表型（对于方案参见Bossuet-Greif等人，2017）或双链DNA断裂的定量来评估对真核细胞的大肠杆菌素基因毒性效应的可视化和定量在彗星试验（揭示DNA片段化）或H2AX组蛋白磷酸化作用宿主细胞核中，双链DNA标记断裂。组蛋白H2AX的磷酸化表征为对遗传毒性剂的早期和敏感反应（Audebert等人，2010）。证明H2AX磷酸化比彗星试验在体外以及体内灵敏度高10-100倍（Audebert等人， ...
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