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Date:
2016-11-20
[Abstract] Cryopreservation is commonly used for storing viable cells, tissues, organs or organisms at ultralow temperatures, and usually involves immersion in liquid nitrogen at -196 °C. Here we provide a detailed cryopreservation protocol for C. reinhardtii based on Crutchfield’s work (Crutchfield et al., 1999), with minor changes (Yang and Li, 2016). In this study, we compared the cryoprotection effect of two common cryopreservation agents (CPAs), methanol and DMSO. Furthermore, the two-step cryopreservation process was divided into five stages to study the factors affecting the ...
[摘要] 冷冻保存通常用于在超低温度下储存活细胞，组织，器官或生物体，并且通常包括在-196℃的液氮中浸泡。在这里，我们提供了一个详细的cryopreservation协议。基于Crutchfield的工作（Crutchfield et al 。，1999），并进行微小的改变（Yang和Li，2016）。在这项研究中，我们比较了两种普通冷冻保存剂（CPAs），甲醇和DMSO的冷冻保护作用。此外，两步冷冻保存过程分为五个阶段，以研究影响每个阶段的生存率的因素。我们发现使用甲醇作为CPA，结合此处概述的冷却过程（以1℃/min的速率从25℃冷却至-55℃）对于冷冻保存后的细胞存活是不可缺少的。这里描述的解冻过程（在35℃解冻5分钟）对于提高存活率也是重要的。
[背景] 现在，冷冻保存经常用于储存C的转基因品系或突变系。以及涉及该生物体的实验需要。 Morris等人。 （1979）讨论了不同CPA在冷却中的影响，温度和存活率之间的关系，有或没有CPA，和冷却速度。他们发现，加入甲醇后，半致死温度是测试的所有CPA中最低的（-14.4℃），而DMSO的温度为-4.9℃（Morris等人， 1979）。
通过在室温下在7％（v/v）DMSO中储存过夜，随后在-70℃下储存，Johnson和Dutcher（1993）获得了最高的活力，在10℃下接近10％。莱茵哈德文化。然而，存活率可以在C中被限制。特别是在我们使用的细胞系CC-125中，尽管作者的主张是由液体培养引起的，但存活率仅为0.34％。然而，该方法是耗时的并且导致低的细胞存活力。 ...
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