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Dynabeads® His-Tag Isolation and Pulldown

Dynabeads® His-Tag Isolation and Pulldown

公司名称: Thermo Fisher Scientific
产品编号: 10104D
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Tandem Purification of His6-3x FLAG Tagged Proteins for Mass Spectrometry from Arabidopsis
Author:
Date:
2016-12-05
[Abstract]  Tandem affinity purification is a powerful method to identify protein complexes that function in association with a known gene of interest. This protocol describes a methodology to capture proteins tagged with His6-3x FLAG explicitly for the purpose of on-bead digestion and identification by mass spectrometry. The high sensitivity and specificity of our methods allow for purification of proteins expressed at native levels from endogenous promoters to enable uncovering the functional roles of plant protein complexes. [摘要]  串联亲和纯化是识别与已知感兴趣基因相关联的蛋白质复合物的有力方法。 该方案描述了一种用于捕获用His6-3x FLAG标记的蛋白质的方法,用于通过质谱法进行珠粒消化和鉴定。 我们的方法的高灵敏度和特异性允许从内源启动子纯化以天然水平表达的蛋白质,以揭示植物蛋白复合物的功能作用。
【背景】蛋白质复合物作为信号平台,分子机器和构建细胞生命的支架。鉴定蛋白质 - 蛋白质相互作用(PPI)或蛋白质复合物的组成对于提供对基因生物化学功能的了解是非常重要的。因此,需要了解发现PPI的简便方法,以了解基因型如何决定植物中的表型。
通常使用的蛋白质纯化方法包括色谱法,例如大小排阻色谱法(也称为凝胶过滤),离子交换层析和亲和层析。通常需要组合几种不同的色谱方法以达到足够的纯度以鉴定相关的复合物。最近,亲和纯化与质谱联用(AP-MS)已经成为系统地鉴定体内蛋白质 - ...

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