| Assembly of Genetic Circuits with the Mammalian ToolKit
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Author:
Date:
2020-03-05
[Abstract] The ability to rapidly assemble and prototype cellular circuits is vital for biological research and its applications in biotechnology and medicine. The Mammalian ToolKit (MTK) is a Golden Gate-based cloning toolkit for fast, reproducible and versatile assembly of large DNA vectors and their implementation in mammalian models. The MTK consists of a curated library of characterized, modular parts that can be assembled into transcriptional units and further weaved into complex circuits. These circuits are easily repurposed and introduced in mammalian cells by different methods.
[摘要] [摘要 ] 快速组装和原型细胞电路的能力对于生物学研究及其在生物技术和医学中的应用至关重要。哺乳动物工具箱（MTK）是基于金门大桥的克隆工具箱，用于快速，可复制和通用的大型DNA载体组装及其在哺乳动物模型中的实现。MTK由精选的，模块化的零件组成的精选库组成，这些零件可以组装成转录单位，并进一步编织成复杂的电路。这些电路很容易重新利用，并通过不同的方法引入哺乳动物细胞。
[背景 ] 分子克隆是现代生物技术与重新利用重组DNA导入多种基因电路可以表示目的的频谱的能力的标志。但是，探索遗传电路构建中可能存在的排列的主要局限性在于能否对电路设计进行快速原型设计，测试和实施改进。为了实现这一目标，需要从常规的克隆方法（如Gibson克隆（Akama-Garren 等人，2016）或限制性酶切消化）中加快从设计遗传回路到将其递送至细胞的时间。我们设计了一个框架，在该框架中，传统的基因电路被分解成其组成部分，以便人们可以轻松地交换这些组成部分，以快速组装出巨大的组合，从而评估每次迭代如何影响功能。受早期克隆工具包迭代的启发（Weber 等人，2011 a和2011b ; Duportet 等人，2014; Lee 等人，2015; Martella 等人，2017;Pérez-González 等人，2017; Halleran 等人，2017）等人，2018年; ...
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| A Golden Gate-based Protocol for Assembly of Multiplexed gRNA Expression Arrays for CRISPR/Cas9
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Author:
Date:
2016-12-05
[Abstract] The CRISPR (clustered regularly interspaced short palindromic repeats)-associated protein 9 (Cas9) has become the most broadly used and powerful tool for genome editing. Many applications of CRISPR-Cas9 require the delivery of multiple small guide RNAs (gRNAs) into the same cell in order to achieve multiplexed gene editing or regulation. Using traditional co-transfection of single gRNA expression vectors, the likelihood of delivering several gRNAs into the same cell decreases in accordance with the number of gRNAs. Thus, we have developed a method to efficiently assemble gRNA expression ...
[摘要] CRISPR（聚簇定期间隔短回文重复序列）相关蛋白9（Cas9）已成为最广泛使用和强大的基因组编辑工具。 CRISPR-Cas9的许多应用需要将多个小导向RNA（gRNA）递送到相同的细胞中以实现多重基因编辑或调节。使用单个gRNA表达载体的传统共转染，将几个gRNA递送到相同细胞中的可能性根据gRNA的数量减少。因此，我们开发了使用Golden-Gate装配方法（Vad-Nielsen等人，2016）将gRNA表达盒（2-30gRNA）有效地装配到一个单一载体中的方法。在这个协议，我们描述详细的分步指示的多路复用gRNA表达式数组的组装。在我们的表达阵列中使用的gRNA支架是由人U6启动子驱动的来自化脓性链球菌的Cas9蛋白的gRNA 1.0系统。
关键字： CRISPR，SpCas9，金门汇编，多重gRNA阵列，同时遗传操作
[背景] ...
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