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Date:
2017-01-05
[Abstract] One of the most successful fluorescent proteins, used as a reporter of gene expression in many bacterial, plant and animals, is green fluorescent protein and its modified forms, which also function well in cyanobacteria. However, these fluorescent proteins do not allow rapid and economical quantitation of the reporter gene product, as does the popular reporter gene lacZ, encoding the enzyme β-galactosidase. We provide here a protocol for the in situ localization of β-galactosidase activity in cyanobacterial cells. This allows the same strain to be used for both a simple, ...
[摘要] 在许多细菌，植物和动物中用作基因表达的报告基因的最成功的荧光蛋白之一是绿色荧光蛋白及其修饰形式，其在蓝细菌中也起良好作用。然而，与编码β-半乳糖苷酶的流行的报道基因lacZ一样，这些荧光蛋白不允许报道基因产物的快速和经济的定量。我们在这里提供了在蓝细菌细胞中原位β-半乳糖苷酶活性定位的方案。这允许将相同的菌株用于具有底物邻硝基苯基-β-半乳糖苷（ONPG）的简单，定量，比色测定，并且用于灵敏的，基于荧光的细胞型定位使用5-十二烷酰氨基荧光素二-β-D-吡喃半乳糖苷（C12-FDG）的基因表达。
背景 鱼腥藻变种是一种丝状蓝细菌，其区分称为异养细胞的特异性细胞，其特异性用于固氮（Kumar等人，2010; Maldener and Muro Pastor，2010）。由于在96孔中易于定量，酶，比色，β-半乳糖苷酶测定，我们使用大肠埃希氏菌的 lacZ 基因作为蓝细菌基因表达的转录报告基因（Griffith和Wolf，2002）和使用相同的菌株用于使用荧光底物5-十二烷基聚氨基荧光素二-β-D-吡喃半乳糖苷（C12-FDG）的原位定位基因表达的能力（ Thiel等人，1995; ...
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