| Notch Ligand Binding Assay Using Flow Cytometry
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Author:
Date:
2017-12-05
[Abstract] Notch signaling is an evolutionarily conserved signaling pathway that plays an indispensable role during development, and in the maintenance of homeostatic processes, in a wide variety of tissues (Kopan, 2012; Hori et al., 2013). The multifaceted roles of Notch signaling are stringently regulated at different levels. One of the most important aspects of regulation is the binding of different Notch ligands to each Notch receptor (NOTCH1-NOTCH4). Canonical ligands Delta or Serrate (in Drosophila), and Delta-like (DLL1 and DLL4) or Jagged (JAG1 and JAG2) (in mammals), are ...
[摘要] Notch信号传导是进化上保守的信号传导途径，在发育过程中以及在各种组织中维持体内平衡过程中起着不可或缺的作用（Kopan，2012; Hori等人，2013）。 Notch信号的多方面作用在不同的层面上受到严格的调控。监管的最重要的方面之一是不同Notch配体与各Notch受体（NOTCH1-NOTCH4）的结合。典型的配体Delta或Serrate（在果蝇中）和Delta样（DLL1和DLL4）或Jagged（JAG1和JAG2）（在哺乳动物中）是跨膜糖蛋白。在一个细胞上表达的配体结合相邻细胞上的Notch受体以诱导Notch信号传导。通过O-岩藻糖和O-GlcNAc聚糖对Notch受体细胞外结构域的糖基化作为Notch信号强度的关键调节剂已经得到很好的确立（Stanley and Okajima，2010; Haltom and Jafar-Nejad，2015; Sawaguchi et al。 >，2017）。为了表征Notch配体与分离细胞中的Notch受体的结合，我们利用人Fc区在C端标记的Notch配体胞外结构域，并通过流式细胞术确定荧光抗Fc抗体的结合。
【背景】众所周知，细胞增殖，分化和凋亡受Notch信号调节。 ...
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| Efficient Production of Functional Human NKT Cells from Induced Pluripotent Stem Cells − Reprogramming of Human Vα24+iNKT Cells
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Author:
Date:
2017-05-20
[Abstract] Antigen-specific T cell-derived induced pluripotent stem cells (iPSCs) have been shown to re-differentiate into functional T cells and thus provide a potential source of T cells that could be useful for cancer immunotherapy. Human Vα24+ invariant natural killer T (Vα24+iNKT) cells are subset of T cells that are characterized by the expression of an invariant Vα24-Jα18 paired with Vβ11, that recognize glycolipids, such as α-galactosylceramide (α-GalCer), presented by the MHC class I-like molecule CD1d. Vα24+iNKT cells capable of producing IFN-γ are reported to ...
[摘要] 抗原特异性T细胞来源的诱导多能干细胞（iPSCs）已显示重新分化为功能性T细胞，从而提供可用于癌症免疫治疗的T细胞的潜在来源。不变性自然杀伤T（Vα24 + iNKT）细胞的人Vα24 + 细胞是T细胞的子集，其特征在于与Vβ11配对的不变Vα24-Jα18的表达，其识别糖脂，如α-半乳糖神经酰胺（α-GalCer），由MHC I类分子CD1d呈递。据报道能够产生IFN-γ的Vα24 + i / KT细胞增加抗肿瘤反应，其影响NK细胞和CD8 +细胞毒性T淋巴细胞以消除MHC - 和MHC + 肿瘤细胞。在这里，我们描述了将人Vα24 + iNKT细胞重编程到iPSC中的鲁棒方案，然后将其重新分化为Vα24 + iNKT细胞（iPS-Vα24功能的iNKT）。我们进一步提供了测定iPS-Vα24 + iNKT细胞活性的方案。背景 以前有报道说，针对晚期非小细胞肺癌（NSCLC）和头颈部癌症的Vα24 + iNKT细胞癌免疫治疗的临床试验显示疗效，耐受性良好（Motohashi et al。等人，2009; Yamasaki等人，2011）。然而，已知来自外周血单核细胞（PBMC）的Vα24 ...
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| Relative Stiffness Measurements of Cell-embedded Hydrogels by Shear Rheology in vitro
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Author:
Date:
2017-01-05
[Abstract] Hydrogel systems composed of purified extracellular matrix (ECM) components (such as collagen, fibrin, Matrigel, and methylcellulose) are a mainstay of cell and molecular biology research. They are used extensively in many applications including tissue regeneration platforms, studying organ development, and pathological disease models such as cancer. Both the biochemical and biomechanical properties influence cellular and tissue compatibility, and these properties are altered in pathological disease progression (Cox and Erler, 2011; Bonnans et al., 2014). The use of cell-embedded ...
[摘要] 由纯化的细胞外基质（ECM）组分（如胶原，纤维蛋白，Matrigel和甲基纤维素）组成的水凝胶系统是细胞和分子生物学研究的支柱。它们广泛用于许多应用，包括组织再生平台，研究器官发育和病理疾病模型如癌症。生物化学和生物力学性质都影响细胞和组织相容性，并且这些性质在病理疾病进展中发生改变（Cox和Erler，2011; Bonnans等人，2014）。在诸如癌症的疾病模型中使用细胞嵌入的水凝胶允许询问细胞诱导的微环境生物力学变化（Madsen等人，2015）。在这里，我们报告一种使用受控应变旋转流变仪测量这些细胞诱导的体外变化的简单方法。
背景 纤维化和实体瘤伴随着其天然组织的病理重塑（Cox和Erler，2011; Bonnans等人，2014）。在两种病理状况下，局部组织环境经历物理化学和生物学变化，导致组织刚度（弹性模量）增加（Humphrey等人，2014）。增强的组织/基质调节导致细胞行为改变，细胞形态，分化状态，增殖，迁移和干性的机械信号。在癌症的临床前动物模型中，这些变化可以驱动恶性进展和转移性扩散（Bonnans等人，2014）。不足为奇的是，靶基质硬化近年来受到了极大的关注，几项临床试验已经开始（Kai等人，2016）。
＆nbsp;基质组分的弹性和机械性能可以使用原子力显微镜（AFM）进行检查，原子力显微镜（AFM）是一种提供纳米分辨率并以picoNewton分辨率同时测量施加力的技术（Kasas和Dietler，2008）。然而，AFM不适用于理解较大的3D矩阵的弹性特性。使用剪切流变学可以更精确地检查体积3D矩阵的机械性能（Picout和Ross-Murphy，2003）。流变学是研究当施加力时材料如何变形。因此，将剪切应力施加到3D矩阵可以确定体积3D矩阵的弹性模量（刚度）。在该方案中，我们描述了一种通过剪切流变学测量细胞诱导的与癌相关成纤维细胞嵌入的水凝胶的基质刚度变化的方法。 ...
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