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VWR® High-Performance Centrifuge Tubes with Flat or Plug Caps, Polypropylene, 50 mL

VWR® High-Performance Centrifuge Tubes with Flat or Plug Caps, Polypropylene

公司名称: VWR
产品编号: 89039-658
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HIVGKO: A Tool to Assess HIV-1 Latency Reversal Agents in Human Primary CD4+ T Cells
Author:
Date:
2018-10-20
[Abstract]  While able to suppress HIV replication in HIV infected individuals, combination antiretroviral therapy (ART) fails to eliminate viral latent reservoir, which consists in integrated transcriptional silenced HIV provirus. So far, identification of latently-infected cells has relied on activating cells to induce expression of HIV proteins which can then be detected. Unfortunately, this activation significantly changed the cell phenotype. We developed a novel HIV reporter, named HIVGKO, that allows the purification of latently-infected cells in absence of reactivation. Indeed, latent ... [摘要]  虽然能够抑制HIV感染个体中的HIV复制,但联合抗逆转录病毒疗法(ART)无法消除病毒潜伏性储库,其包含整合的转录沉默的HIV原病毒。 到目前为止,潜伏感染细胞的鉴定依赖于激活细胞以诱导HIV蛋白的表达,然后可以检测到这些蛋白的表达。 不幸的是,这种激活显着改变了细胞表型。 我们开发了一种名为HIV GKO 的新型HIV报告基因,可以在没有再激活的情况下纯化潜伏感染的细胞。 实际上,可以通过EF1a驱动的mKO2的表达和LTR驱动的csGFP的缺乏表达来鉴定潜伏细胞。 该方案可用于研究LCA(潜伏期逆转剂)在原代细胞中重新激活潜伏HIV的有效性。

【背景】新版双标记病毒(HIV GKO )含有5'LTR中HIV-1启动子控制下的密码子转换eGFP(csGFP)和一种独特的无关荧光蛋白 mKO2在细胞延伸因子αα启动子(EF1α)的控制下。 当使用与遗传相关的荧光蛋白时,由于重组问题,在这些报道分子中使用不相关的荧光蛋白是很重要的。 因此,生产性感染的细胞主要是csGFP + mKO2 + (有些可能只是GFP + ),而潜伏感染的细胞是csGFP - mKO2 + 。 流式细胞仪如分拣机AriaII允许纯化纯感染人群(生产性,潜伏性和/或未感染),而分析仪LSRII允许评估HIV GKO LTR的转录激活。 感染后的时间很短。

Dual-probe RNA FRET-FISH in Yeast
Author:
Date:
2018-06-05
[Abstract]  mRNA Fluorescence In Situ Hybridization (FISH) is a technique commonly used to profile the distribution of transcripts in cells. When combined with the common single molecule technique Fluorescence Resonance Energy Transfer (FRET), FISH can also be used to profile the co-expression of nearby sequences in the transcript to measure processes such as alternate initiation or splicing variation of the transcript. Unlike in a conventional FISH method using multiple probes to target a single transcript, FRET is limited to the use of two probes labeled with matched dyes and requires the use ... [摘要]  mRNA荧光原位杂交(FISH)是一种常用于分析细胞中转录物分布的技术。 当与常见的单分子技术荧光共振能量转移(FRET)相结合时,FISH也可用于分析转录本中附近序列的共表达以测量转录本的替代启动或剪接变异等过程。 与使用多个探针靶向单个转录物的常规FISH方法不同,FRET限于使用用匹配染料标记的两个探针,并且需要使用敏化发射。 任何能够灵敏地检测Cy3和Cy5单分子的宽视场显微镜应该能够测量酵母细胞中的FRET。 或者,可以使用FRET-FISH方法明确确定转录本的身份,而不使用其他FISH技术中使用的引导探针组。

【背景】单细胞转录物分布的定量通常通过用多个探针靶向mRNA来实现,以实现可以与非特异性结合的探针区分开的明亮信号(Raj和Tyagi,2010)。但是,在某些情况下,转录本上有特征,例如剪接变体或替代起始位点,这与常规FISH探针组无法区分。这些同种型序列可以具有短的50nt唯一识别序列。使用两种探针,可以使用FRET对定位结合的任一侧,同时定量多达三种mRNA同种型,例如,具有两种探针的同种型(FRET),具有探针1的同种型仅限于探针2的同种型。依赖于单个荧光团或荧光团对需要通过EMCCD进行灵敏检测。而且,可以使用FRET对(Wadsworth等人,2017)来估计没有其他同种型的序列的探针的检测效率。

Single-probe RNA FISH in Yeast
Author:
Date:
2018-06-05
[Abstract]  Quantitative profiling of mRNA expression is an important part of understanding the state of a cell. The technique of RNA Fluorescence In Situ Hybridization (FISH) involves targeting an RNA transcript with a set of 40 complementary fluorescently labeled DNA oligonucleotide probes. However, there are many circumstances such as transcripts shorter than 200 nt, splicing variations, or alternate initiation sites that create transcripts that would be indistinguishable to a set of multiple probes. To this end we adapted the standard FISH protocol to allow the use of a single probe with a ... [摘要]  mRNA表达的定量分析是理解细胞状态的重要部分。 RNA荧光原位杂交(FISH)技术涉及用一组40个互补的荧光标记的DNA寡核苷酸探针靶向RNA转录物。 然而,许多情况下,如转录本短于200 nt,剪接变异,或创建转录本的替代起始位点,这些转录本与一组多重探针无法区分。 为此,我们调整了标准FISH方案,以允许使用具有单个荧光团的单个探针来量化出芽酵母细胞内的转录物的量。 除了允许定量短转录本或转录本的短特征之外,该技术还降低了执行FISH的成本。

【背景】通过单分子荧光原位杂交(smFISH)可以精确定量单细胞转录谱。 该过程通过用多个荧光标记的DNA寡核苷酸探针靶向单个mRNA分子给出了良好的噪声信号(Raj和Tyagi,2010)。 使用该方案,不能检测到长度短于200个核苷酸的mRNA。 然而,在大多数实验中,绝对转录本拷贝数比相对拷贝数少。 为了检测短的转录物或序列,可以使用短的单个DNA寡核苷酸探针。 当使用单个荧光团计数mRNA时,单个探针的检测效率大于50%(Wadsworth等人,2017)。

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