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Author:
Date:
2017-12-05
[Abstract] In studies of brain function, it is essential to understand the underlying neuro-architecture. Very young zebrafish larvae are widely used for neuroarchitecture studies, due to their size and natural transparency. However, this model system has several limitations, due to the immaturity, high rates of development and limited behavioral repertoire of the animals used.
We describe here a modified version of the passive clearing technique (PACT) (Chung et al., 2013; Tomer et al., 2014; Yang et al., 2014; Treweek et al., 2015), which facilitates ...
[摘要] 在脑功能研究中，了解潜在的神经结构是至关重要的。非常年轻的斑马鱼幼虫被广泛用于神经构造研究，由于它们的大小和自然透明度。然而，这个模型系统有一些局限性，由于使用的动物不成熟，发育率高，行为表现有限。
我们在这里描述了被动清除技术（PACT）的改进版本（Chung等人，2013; Tomer等人，2014; Yang等人， ，2014; Treweek et。，2015），这有助于大型水生物种标本的神经解剖学研究。这种方法最初是为斑马鱼（2017年）开发的（ Danio rerio ）（2017年;Frétaud等人，2017年; Mayrhofer等人，2017年; Xavier “）等人，2017），但也已经成功地在其他鱼类上进行了测试，如鲭鱼（Oryzias latipes ）（Dambroise et al。，2017 ），墨西哥洞穴鱼（ Astyanax mexicaus ）和非洲斑马鱼（metriaclima zebra ）以及其他水生物种，如非洲爪蟾属。 （非洲爪蟾热带非洲爪蟾）（Fini等人，2017）。该协议基于由Deisseroth实验室等开发和修改的CLARITY方法（Chung等人，2013; Tomer等人，2014; Yang等人，2014），适用于水生物种，特别是斑马鱼（zPACT）。
该协议旨在通过在聚丙烯酰胺/甲醛网状物中交联来保持组织的整体结构，使斑马鱼标本光学透明。然后通过SDS处理除去存在于样品中的大部分脂质，通过消除导致不透明的水/脂质界面处的光散射来均化样品的折射率。最后的清除步骤包括将样品在基于果糖的固定介质（衍生自SeeDB）（Ke等人，2013）中孵育，其折射率与物镜的折射率相匹配的显微镜。该技术与使用绿色荧光蛋白（GFP）在特定细胞群体中表达的转基因斑马鱼的组合提供了描述其他技术不可见的解剖细节的机会。 ...
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Author:
Date:
2016-11-05
[Abstract] Here we report the adaptation of the CLARITY technique to plant tissues with addition of enzymatic degradation to improve optical clearing and facilitate antibody probe penetration. Plant-Enzyme-Assisted (PEA)-CLARITY, has allowed deep optical visualisation of stains, expressed fluorescent proteins and IgG-antibodies in tobacco and Arabidopsis leaves. Enzyme treatment enabled penetration of antibodies into whole tissues without the need for any sectioning of the material. Therefore, this protocol facilitates protein localisation of intact tissue in 3D whilst retaining cellular ...
[摘要] 在这里我们报告CLARITY技术适应植物组织与添加的酶降解，以提高光学清除和促进抗体探针穿透。植物 - 酶辅助（PEA）-CLARITY，允许在烟草和拟南芥叶中的污渍，表达的荧光蛋白和IgG抗体的深度光学可视化。酶处理使得抗体能够穿透进入整个组织，而不需要材料的任何切片。因此，该方案促进3D中完整组织的蛋白定位，同时保留细胞结构。
[背景] 使用组织学染色等技术固定和包埋植物组织进行分子探查，免疫组织化学或原位杂交几十年来一直是细胞生物学研究的基础。将这些技术应用于3D组织分析严重受限于需要切片组织，对每个部分成像，然后将图像重新组装成感兴趣结构的3D表示。这里我们提出从二维平面到三维的基本转变，同时保留感兴趣的分子结构，而不需要切片植物组织。固定和"清除"技术，如SeeDB，ScaleA2，3DISCO，CLARITY和其最近的变种PACT的最新进展使小鼠和大鼠模型中完整成像的整个胚胎，大脑和其他器官。新的CLARITY系统固定并结合丙烯酰胺网状结构内的组织。蛋白质和核酸通过甲醛与丙烯酰胺网状物共价连接，然后使用洗涤剂（SDS）除去动物细胞膜的光学干扰脂质结构。这使得这样的组织是光学透明的，并且适合于使用共聚焦显微镜的高达〜5mm的深度成像
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