| SMART (Single Molecule Analysis of Resection Tracks) Technique for Assessing DNA end-Resection in Response to DNA Damage
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Author:
Date:
2020-08-05
[Abstract] DNA double strand breaks (DSBs) are among the most toxic lesions affecting genome integrity. DSBs are mainly repaired through non-homologous end joining (NHEJ) and homologous recombination (HR). A crucial step of the HR process is the generation, through DNA end-resection, of a long 3′ single-strand DNA stretch, necessary to prime DNA synthesis using a homologous region as a template, following DNA strand invasion. DNA end resection inhibits NHEJ and triggers homology-directed DSB repair, ultimately guaranteeing a faithful DNA repair. Established methods to evaluate the DNA end-resection ...
[摘要] [摘要] DNA双链断裂（dsb）是影响基因组完整性的最具毒性的损伤之一。dsb主要通过非同源末端连接（NHEJ）和同源重组（HR）进行修复。HR过程的一个关键步骤是通过DNA末端切除，产生一个长的3′单链DNA链，这是在DNA链入侵后，以同源区域为模板进行DNA合成所必需的。DNA末端切除抑制NHEJ并触发同源定向的DSB修复，最终保证DNA的可靠修复。已建立的评价DNA末端切除过程的方法是免疫荧光法分析磷酸化S4/8rpa32蛋白病灶（DNA末端切除的标志物）或磷酸化S4/8rpa32蛋白水平。近年来，切除轨迹单分子分析（SMART）被认为是一种可靠的方法，可以通过免疫荧光法观察S期特异性DNA损伤剂（如喜树碱）处理细胞后产生的长3′单链DNA尾。然后，通过图像分析软件（如Photoshop）测量DNA束长度，评价DNA末端切除机的处理能力。DNA纤维的制备是在非变性条件下进行的，因此免疫荧光只检测DSB处理产生的特定的3′单链DNA尾。
[背景] ...
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| Adhesion of Enteroaggregative E. coli Strains to HEK293 Cells
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Author:
Date:
2018-04-20
[Abstract] Enteroaggregative Escherichia coli (EAEC) is a recognized cause of acute diarrhea among both children and adults worldwide. EAEC strains are characterized by the presence of aggregative adherence fimbriae (AAF), which play a key role in pathogenesis by mediating attachment to the intestinal mucosa and by triggering host inflammatory responses. The aggregative adherence fimbria II (AAF/II) is the most important adherence factor of EAEC prototype strain 042 (EAEC042) to intestinal cells. Multiple receptors for AAF/II on epithelial cells have been identified including the transmembrane ...
[摘要] 肠道集聚性大肠杆菌（EAEC）是全球儿童和成人急性腹泻的公认原因。 EAEC菌株的特征在于存在聚集粘附菌毛（AAF），其通过介导与肠粘膜的附着和通过引发宿主炎症反应而在发病机制中起关键作用。 聚合粘附菌毛II（AAF / II）是EAEC原型菌株042（EAEC042）对肠细胞最重要的粘附因子。 已经鉴定了上皮细胞上AAF / II的多种受体，包括跨膜信号传导粘蛋白Muc1。 该协议描述了测量EAEC菌株对表达Muc1糖蛋白的HEK293细胞的依从性的方法。
【背景】EAEC是世界范围内地方性和流行性腹泻病的重要原因。尽管发展中国家儿童腹泻最常见，但EAEC还与免疫受损成人腹泻，旅行者和工业化国家的食源性疾病有关，例如由志贺毒素（Stx）2a型产生的大致致命爆发2011年在北欧的血清型O104：H4的EAEC菌株（Harrington等人，2006; Rasko等人，2011）。 EAEC发病机制由生物体粘附肠细胞，产生肠毒素和细胞毒素并最终诱导炎症的能力决定（Harrington等，2006）。 EAEC对肠细胞的依从性由AAF菌毛粘附素介导（Czeczulin等人，1997）。迄今为止，已经描述了至少5种AAF菌毛的变体，全部编码在范围为55至65MDa的毒力质粒中（Jonsson等人，2015）。 ...
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| In vitro Co-culture of Mesenchymal Stem Cells and Endothelial Colony Forming Cells
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Author:
Date:
2017-10-20
[Abstract] The discovery of endothelial colony forming cells (ECFCs) with robust self-renewal and de novo vessel formation potentials suggests that ECFCs can be an excellent cell source for cardiovascular diseases treatment through improving neovascularization in the ischemic tissues. However, their engraftment after transplantation resulted to be low. Previous studies showed mesenchymal stem/stromal cells (MSCs) could improve the survival and capillary formation capacity of ECFCs in co-culture systems. In this article, we describe a protocol for in vitro co-culture of MSCs and ECFCs to prime ...
[摘要] 发现具有强大自我更新和从头血管形成潜力的内皮细胞集落形成细胞（ECFCs）表明，ECFC可以通过改善缺血组织的新生血管形成，成为心血管疾病治疗的优良细胞来源。 然而，移植后的移植导致了低位移植。 以前的研究显示间充质干/基质细胞（MSC）可以改善共培养系统中ECFCs的存活和毛细管形成能力。 在这篇文章中，我们描述了体外协调MSCs和ECFCs共同培养ECFC以实现更好的移植。
【背景】内皮祖细胞（EPC）被定义为能够通过血管发生过程形成新血管的细胞群。 2004年，Ingram等人鉴定了来自人脐带血的称为“内皮细胞集落形成细胞（ECFC）”的离体培养物中的特异性高度增殖的EPC群体Ingram等人，2004），并且这些细胞最近被宣布代表EPCs（Medina等人，2017）。类似的群体也可以从具有等效血管化潜力和临床相关数量的人类胎盘组织中分离（Patel等人，2013; Shafiee等人，2015） ）。因此，ECFC移植已被提出作为缺血性疾病如心肌梗塞或关键性腿部缺血的治疗方法。然而，移植后的ECFCs植入物和血管生成潜力被证明是低的（Shafiee等人，2017; ...
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