| In vitro Conditions for Dark Growth and Analysis of Maize Seedlings
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Author:
Date:
2020-03-20
[Abstract] Maize is an important model organism for understanding plant traits essential for proper growth and germination. One type of growth, skotomorphogenesis, occurs in the absence of light. Seedlings grown in the absence of light exhibit dramatic differences in stem and leaf development compared to light-grown plants. Dark-growth conditions require the use of highly controlled plant growth environments. Here, we provide step-by-step instructions for creating a soilless and dark plant growth environment for maize using half-strength Murashige and Skoog media solidified with agar in clear boxes that ...
[摘要] [摘要] 玉米为理解植物性状进行适当的生长和发芽所必需的重要的模式生物。一种生长类型，变态发生，发生在没有光照的情况下。与光照生长的植物相比，在没有光照的情况下生长的幼苗在茎和叶的发育上表现出巨大的差异。黑暗生长条件要求使用高度受控的植物生长环境。在这里，我们提供使用半强度Murashige 来为玉米创建无土和深色植物生长环境的分步说明 和Skoog培养基在透明的盒子中用琼脂固化，并用铝箔覆盖。该协议的好处在于它不需要特殊的黑暗生长条件，并且可以轻松，均匀地向生长培养基中补充激素或其他化学物质。
[背景] 无土培养基和温度受控的环境已经使用了八十多年，以产生可再生的植物生长（McClary，1940； George 等，2008）。的Murashige 和Skoog（MS）培养基，含有盐，氨基酸和维生素，是最常用的植物生长中的一个媒体（的Murashige 和Skoog，1962）。MS最初是为烟草开发的，但此后已用于种植其他植物，包括 拟南芥和玉米。与其他无土培养基（例如泥炭，珍珠岩和ver石）不同，这种生长培养基不易与植物激素反应（Best 等，2014和2017； Malik 等，2014）。因此，可以将激素添加到生长培养基中，以比较野生型和突变型生长之间的反应。
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| Separation and Purification of Glycosaminoglycans (GAGs) from Caenorhabditis elegans
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Date:
2017-08-05
[Abstract] The nematode Caenorhabditis elegans is a popular model organism for studies of developmental biology, neurology, ageing and other fields of basic research. Because many developmental processes are regulated by glycosaminoglyans (GAGs) on cell surfaces and in the extracellular matrix, methods to isolate and analyze C. elegans GAGs are needed. Such methods have previously been optimized for other species such as mice and zebrafish. After modifying existing purification protocols, we could recently show that the nematodes also produce chondroitin sulfate, in addition to heparan ...
[摘要] 线虫秀丽隐杆线虫是研究发育生物学，神经学，衰老等基础研究领域的流行模型生物。 因为许多发育过程由细胞表面和细胞外基质中的糖胺聚糖（GAG）调节，分离和分析C的方法。 线虫需要GAG。 此类方法先前已针对其他物种如小鼠和斑马鱼进行了优化。 在修改现有的纯化方案后，我们最近可以显示除了硫酸乙酰肝素外，线虫也产生硫酸软骨素，因此挑战了仅通过C合成非硫酸软骨素的观点。线虫。 我们在这里介绍我们适用于C的协议。线虫。 由于净化策略涉及非硫酸化和硫酸化GAG的分离，所以对于其他可能有利的方法也是有用的。
【背景】糖胺聚糖（GAG）是重复二糖单元的直链多糖链，其通常被硫酸根取代。除了透明质酸，其是在质膜上合成而不被锚定到任何蛋白质的非硫酸化GAG，所有其他GAG都与核心蛋白共价连接，从而形成蛋白聚糖（PG）。在PG上发现的最常见的GAG是硫酸乙酰肝素（HS）和硫酸软骨素（CS）/硫酸皮肤素，含有N-乙酰基 - 葡糖胺和N，N-乙酰基 - 半乳糖胺，分别（张，2010）。在高尔基隔室的生物合成过程中，它们是非模板驱动的过程，它们经过多种修饰，包括将葡萄糖醛酸差向异构化成艾杜糖醛酸，并在不同位置硫酸化（Bulow和Hobert，2006; ...
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| Culturing Bacteria from Caenorhabditis elegans Gut to Assess Colonization Proficiency
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Author:
Date:
2017-06-20
[Abstract] Determining an accurate count of intestinal bacteria from Caenorhabditis elegans is one critical way to assess colonization proficiency by a given bacteria. This can be accomplished by culturing appropriate dilutions of worm gut bacteria on selective or differential agarized media. Because of the high concentration of bacteria in gut worm, dilution is necessary before plating onto growth media. Serial dilutions can reduce the concentration of the original intestinal sample to levels low enough for single colonies to be grown on media plates, allowing for the calculation of the ...
[摘要] 从秀丽隐杆线虫确定肠道细菌的准确计数是评估给定细菌的定殖能力的关键方法之一。 这可以通过在选择性或差异琼脂培养基上培养适当稀释的蠕虫细菌来实现。 由于肠蠕虫中细菌的浓度高，因此稀释必须在生长培养基上。 连续稀释可以将原始肠样品的浓度降低到足够低的浓度，使单个菌落生长在培养基平板上，从而计算肠样品中细菌的初始计数。
【背景】动物很少分离生活，但与微生物有关。主要与微生物之间的共生关系是Rosentberg和Zilber-Rosenberg在2011年的共生关系。在哺乳动物中，宿主 - 微生物共生相互作用主要发生在粘膜表面，最重要的是肠粘膜。当从野生新鲜分离时，线虫通常在其肠腔内容纳多种细菌菌群，使人联想到高等生物的微生物群落（Duveau和Felix，2012; Bumbarger等，2013）。相比之下，在实验室中，秀丽隐杆线虫通常保持在单一细菌菌株的存在下（Brenner，1974）。大多数情况下，这是革兰氏阴性细菌大肠杆菌。然而，有时使用其他物种，例如革兰氏阳性枯草芽孢杆菌（Garsin等，2003）。成虫蠕虫含有大约10,000个细菌细胞，比宿主蠕虫体细胞数量高10倍（Portal-Celhay和Blaser，2012）：或许巧合的是，这种微生物群与宿主细胞的比例与人类发现的相似。
正在使用不同的策略来测量秀丽隐杆线虫的细菌如异硫氰酸荧光素（FITC）标记的细菌，表达融合报告基因的细菌（绿色荧光蛋白[GFP]或β-半乳糖苷酶））的定殖能力。然而，更准确的方法是测量从蠕虫肠分离出的CFU的数量。在本协议中，我们展示了如何分离和计数秀丽隐杆线虫的大肠杆菌和枯草芽孢杆菌菌株。在枯草芽孢杆菌的情况下，我们还展示了如何区分营养形式与秀丽隐杆线虫内部这种细菌形成的高度抗性孢子。 ...
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