| Isolation and Cultivation of Primary Brain Endothelial Cells from Adult Mice
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Author:
Date:
2017-05-20
[Abstract] Brain endothelial cells are the major building block of the blood-brain barrier. To study the role of brain endothelial cells in vitro, the isolation of primary cells is of critical value. Here, we describe a protocol in which vessel fragments are isolated from adult mice. After density centrifugation and mild digestion of the fragments, outgrowing endothelial cells are selected by puromycin treatment and grown to confluence within one week.
[摘要] 脑内皮细胞是血脑屏障的主要组成部分。 为了研究脑内皮细胞在体外的作用，原代细胞的分离是临床价值。 在这里，我们描述了一种方案，其中血管片段与成年小鼠分离。 在密度离心和片段的温和消化后，通过嘌呤霉素处理选择出生长的内皮细胞，并在一周内生长至汇合。
【背景】血脑屏障保护大脑免受细胞和物质的不受控制的侵入。 这主要是由脑内皮细胞形成的屏障组成的紧密和粘附连接限制细胞旁运输。
该方案被开发以克服维持其关键特征的小鼠脑内皮细胞系的有限可用性，例如表达足够量的紧密连接蛋白如闭合蛋白，ZO-1或紧密连接蛋白-5以诱导高跨内皮细胞抗性。
此外，从内含基因修饰的小鼠中分离脑内皮细胞可以在体外研究基因特异性功能。
使用这种方法，我们以前补充了体内研究，证明NF-κB信号在脑内皮细胞中维持正常血脑屏障功能的重要性（Ridder等，2015）。
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| An Acute Mouse Spinal Cord Slice Preparation for Studying Glial Activation ex vivo
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Author:
Date:
2017-01-20
[Abstract] Pathological conditions such as amyotrophic lateral sclerosis, spinal cord injury and chronic pain are characterized by activation of astrocytes and microglia in spinal cord and have been modeled in rodents. In vivo imaging at cellular level in these animal models is limited due to the spinal cord’s highly myelinated funiculi. The preparation of acute slices may offer an alternative and valuable strategy to collect structural and functional information in vitro from dorsal, lateral and ventral regions of spinal cord. Here, we describe a procedure for preparing acute slices ...
[摘要] 病理状况如肌萎缩性侧索硬化，脊髓损伤和慢性疼痛的特征在于脊髓中星形胶质细胞和小胶质细胞的活化，并已在啮齿动物中建模。 在这些动物模型中的细胞水平的体内成像由于脊髓的高度髓鞘化的功能而受到限制。 急性切片的制备可能提供一种替代和有价值的策略，从脊髓的背侧，外侧和腹侧区域体外收集结构和功能信息。 在这里，我们描述了一种从小鼠脊髓制备急性切片的过程（Garréet al。，2016）。 这个准备应该进一步了解脊髓中的神经胶质细胞是如何急剧地反应各种炎症的挑战。
【背景】已经使用小鼠转基因技术来模拟影响脊髓的不同人类病态，其中许多特征为局部胶质激活，神经炎症的一个标志。利用基于激光扫描显微技术的共焦显微镜（White et al。，1987）和双光子显微镜（Denk等，1990），大大提高了对健康和疾病中胶质生物学的认识。 ）以无创的方式可视化活体动物中的细胞结构和亚细胞结构域;例如，表达遗传编码的记者或钙传感器的小鼠已被用于分别形成胶质结构（体细胞和过程）并研究钙动力学和信号传导（Davalos等人，2005; ...
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