Protease Activity Assay in Fly Intestines
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Author:
Date:
2017-09-20
[Abstract] The intestine is a central organ required for the digestion of food, the absorption of nutrients and for fighting against aggressors ingested along with the food. Impairment of gut physiology following mucosal damages impacts its digestive capacities that consequently will affect growth, wellbeing or even survival of the individual. Hence, the assessment of intestinal functions encompasses, among others, the monitoring of its integrity, its cellular renewing, its immune defenses, the production of enteroendocrine hormones and its digestive capacities. Here, we describe in detail how to assess ...
[摘要] 肠是消化食物所需的中枢器官,吸收营养物质,并与食物一起摄入的侵略者作斗争。 粘膜损伤后的肠道生理损伤影响其消化能力,从而影响个体的生长,健康甚至生存。 因此,肠功能的评估包括监测其完整性,细胞更新,免疫防御,肠内分泌激素的产生及其消化能力。 在这里,我们详细描述如何评估分泌在成年果蝇的肠腔中的蛋白酶的活性。 这种方法也可以用于幼虫肠。 本协议由“蛋白酶荧光检测试剂盒”(产品代码PF0100)中提出的Sigma-Aldrich公司的方案进行了改进和改进。 【背景】肠道受到诸如斋戒,禁食,化学物质,病原体,损伤等诸多压力的影响。肠道能够通过保持其体内平衡的生理平衡来克服这种压力。为了感知进入的压力并产生适应性的维持肠功能的答案,肠已经开发出强健和保守的机制,如局部先天免疫防御和组织再生(Royet和Charroux,2013; Bonfini等,2016)。然而,在某些情况下,肠道稳态的维持可能受到影响。例如,在老化期间,随着许多未成熟或分化不良的细胞的存在,组织稳态维持总体下降(Jasper,2015; ...
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Detection of Reactive Oxygen Species (ROS) in Cyanobacteria Using the Oxidant-sensing Probe 2’,7’-Dichlorodihydrofluorescein Diacetate (DCFH-DA)
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Author:
Date:
2017-09-05
[Abstract] Reactive oxygen species (ROS) are cell signaling molecules synthesized inside the cells as a response to routine metabolic processes. In stress conditions such as ultraviolet radiation (UVR), ROS concentration increases several folds in the cells that become toxic for the cell survival. Here we present the method for in vivo detection of ROS by using an oxidant-sensing probe 2’,7’-dichlorodihydrofluorescein diacetate (DCFH-DA) in cyanobacteria. This method provides reliable, simple, rapid and cost effective means for detection of ROS in cyanobacteria.
[摘要] 活性氧(ROS)是细胞内合成的细胞信号分子,作为对常规代谢过程的反应。 在紫外线照射(UVR)等应激条件下,ROS浓度在细胞中增加数倍,对细胞存活有毒性。 在这里,我们介绍了通过使用蓝细菌中的氧化剂感测探针2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)来体内检测ROS的方法。 该方法提供可靠,简单,快速和成本有效的检测蓝细菌中的ROS的方法。 【背景】蓝藻是最古老的含氧光合自养体;它们在水生和陆地生态系统的生物量生产中发挥重要作用,并作为各种增值产品的来源(Vaishampayan等,2001;Häderet al。,2007; Fischer,2008)。近年来,臭氧层的消耗导致太阳紫外线辐射(UVR)涌入增加,这对所有存在于地球上的生物(包括蓝细菌)都是有害的(Holzinger和Lutz,2006)。 UVR通过作用于DNA /蛋白质或间接通过活性氧(ROS)的氧化损伤直接伤害蓝细菌(He和Häder,2002)。在植物,藻类和哺乳动物细胞中,已经使用各种荧光和化学发光方法检测ROS(Crow,1997; He和Häder,2002; Soh,2006; Wu et al。,2007; Palomero et al。,2008)。 2',7'-二氯二氟荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)是一种非荧光,细胞可渗透的染料,其在细胞酯酶的作用下在细胞内水解成其极性但非荧光形式的DCFH,因此保留在细胞中。通过细胞内ROS和其他过氧化物的作用氧化DCFH使分子变成其可通过各种荧光方法检测的2',7'-二氯荧光素(DCF)的高度荧光形式(He和Häder,2002; ...
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Aggregation Prevention Assay for Chaperone Activity of Proteins Using Spectroflurometry
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Author:
Date:
2017-01-20
[Abstract] The ability to stabilize other proteins against thermal aggregation is one of the major characteristics of chaperone proteins. Molecular chaperones bind to nonnative conformations of proteins. Folding of the substrate is triggered by a dynamic association and dissociation cycles which keep the substrate protein on track of the folding pathway (Figure 1). Usually molecular chaperones exhibit differential affinities with different conformations of the substrate. With the exception of the sHsp family of molecular chaperones, the shift from a high-affinity binding state to the low-affinity ...
[摘要] 稳定其他蛋白质抵抗热聚集的能力是伴侣蛋白质的主要特征之一。分子伴侣与蛋白质的非构象构象结合。通过动态关联和解离循环来触发底物的折叠,这些循环使底物蛋白保持在折叠通路上(图1)。通常分子伴侣表现出与底物不同构象的差异亲和力。除了分子伴侣的sHsp家族之外,从高亲和力结合状态向低亲和力释放状态的转变由ATP结合和水解引发(Haselback和Buchner,2015)。聚集预防测定是一种简单但尚未确定的测定法,用于确定热不稳定蛋白质如麦芽糖糊精葡糖苷酶(MalZ),柠檬酸盐合酶(CS)和Nde I的伴侣活性。这是基于具有伴侣相似活性的蛋白质预防来自热聚集的蛋白质底物(MalZ,CS和Nde I)的前提。在这里,我们描述了使用我们实验室鉴定的两种不同伴侣蛋白,抵抗素和MoxR1的聚合预防测定的详细方案。分析抗性蛋白(hRes)和MoxR1 a结核分枝杆菌蛋白质对预防MalZ /柠檬酸合酶(CS)/ Nde I聚集的影响。
背景 图1.分子伴侣的作用机制。柠檬酸合酶通过越来越多的结构化中间体(I <1>,2 1> ...
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