| FACS-based Isolation of Neural and Glioma Stem Cell Populations from Fresh Human Tissues Utilizing EGF Ligand
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Author:
Date:
2017-12-20
[Abstract] Direct isolation of human neural and glioma stem cells from fresh tissues permits their biological study without prior culture and may capture novel aspects of their molecular phenotype in their native state. Recently, we demonstrated the ability to prospectively isolate stem cell populations from fresh human germinal matrix and glioblastoma samples, exploiting the ability of cells to bind the Epidermal Growth Factor (EGF) ligand in fluorescence-activated cell sorting (FACS). We demonstrated that FACS-isolated EGF-bound neural and glioblastoma populations encompass the sphere-forming colonies in ...
[摘要] 从新鲜组织中直接分离人类神经和胶质瘤干细胞允许其在没有事先培养的情况下进行生物学研究，并且可以在其天然状态中捕获其分子表型的新方面。最近，我们展示了前瞻性地从新鲜人类生发基质和胶质母细胞瘤样品中分离干细胞群的能力，利用细胞在荧光激活细胞分选（FACS）中结合表皮生长因子（EGF）配体的能力。我们证明FACS分离的EGF结合的神经和成胶质细胞瘤细胞群体在体外包含球体形成的集落，并且能够自我更新和多向分化。在此我们详细描述了具有来自新鲜死亡和手术组织的干细胞特性的EGF-结合（即EGFR +）人类神经和胶质瘤细胞的纯化方法。利用天然配体结合能力前瞻性分离干细胞群的能力为了解非培养条件下的正常和肿瘤细胞生物学打开了新的门，并且适用于在种群和单细胞分辨率下的各种下游分子测序研究。
【背景】由于缺乏通用的神经和神经胶质瘤干细胞标志物（Lathia et al。，2015）以及频繁依赖于培养的细胞，理解人神经和胶质瘤干细胞的内在生物学一直是一个挑战比那些直接从组织分离的。跨膜糖蛋白Prominin或CD133是分离神经（Uchida等，2000）和神经胶质瘤干细胞（GSC）（Singh等，2000）的最好描述和经常使用的干细胞标记物之一。等人，2003; Singh等人，2004; ...
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| Protocol for Murine/Mouse Platelets Isolation and Their Reintroduction in vivo
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Author:
Date:
2017-02-20
[Abstract] Platelets and coagulation have long been known to be essential for metastasis in experimental models. In order to study the interactions between tumor cells, platelets and endothelium, we have adapted methods used in coagulation research for the isolation of platelets and their reintroduction into mice. Anti-coagulated murine blood served as the source for platelets. Platelets were separated from other elements of the whole blood by centrifugation. Here the critical elements are first inhibition of coagulation and second isolation and maintenance of the platelets in the presence of inhibitors ...
[摘要] 长期以来，已知血小板和凝血酶在实验模型中对转移至关重要。为了研究肿瘤细胞，血小板和内皮之间的相互作用，我们采用了凝血研究中用于分离血小板及其再引入小鼠的适应方法。抗凝血鼠血液作为血小板的来源。通过离心将血小板与全血的其它元素分离。这里的关键因素是在存在血小板活化抑制剂的情况下首先抑制凝血和血小板的第二次分离和维持。然后用生物染料PKH26荧光标记血小板。这些标记血小板的输注允许显微观察引入的血小板。重新引入后，这些血小板看起来正常起作用，占总血小板的约50％。因为它们是荧光标记的，所以它们很容易被识别。最后，可以使用这些方法通过使用来自基因工程小鼠的血小板来确定改变的基因表达在血小板中的特异性效应。这些方法有助于研究组织培养和鼠模型中血小板和肿瘤细胞之间的相互作用。它们也适用于视频显微镜。在这里，我们提供了我们用于小鼠血小板分离的方法的细节，以及它们的染色用于进一步的显微镜和重新引入小鼠。
背景 已知血小板对于转移是必需的，而且在肿瘤生长期间也起作用，更不用说凝块形成。为了容易识别和追踪血小板，我们开发了荧光标记和再灌注血小板的手段。这使得它们可以容易地在不需要免疫染色的组织中鉴定。使用这些方法，我们显示肿瘤细胞和血小板之间的相互作用在转移早期在肿瘤细胞的存活中起关键作用（Im等人，2004; ...
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