| Lentiviral Barcode Labeling and Transplantation of Fetal Liver Hematopoietic Stem and Progenitor Cells
|
|
Author:
Date:
2017-04-20
[Abstract] Cellular barcoding enables the dissection of clonal dynamics in heterogeneous cell populations through single cell lineage tracing. The labeling of hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) with unique and heritable DNA barcodes, makes it possible to resolve donor cell heterogeneity in terms of differentiation potential and lineage bias at the single cell level, through subsequent transplantation and high-throughput sequencing. Furthermore, cellular barcoding allows for bona fide hematopoietic stem cells (HSCs) to be defined based on functional rather than immunophenotypic parameters. ...
[摘要] 细胞条形码可以通过单细胞谱系追踪来分离异种细胞群体中的克隆动力学。通过独特和可遗传的DNA条形码对造血干细胞和祖细胞（HSPC）进行标记，可以通过随后的移植和高通量测序，在单细胞水平上分化供体细胞异质性，分化潜力和谱系偏倚。此外，细胞条形码可以根据功能而不是免疫表型参数定义真正的造血干细胞（HSC）。
＆nbsp;该协议描述了慢病毒细胞条形码的工作流程，追踪1450天后（dpc）胎肝（FL）Lineage-Sca+ cKit + （LSK）HSPC经过长期重建（图1）（Kristiansen等人，2016），但可以适应于选择的细胞类型或时间框架。
![]()
图1.实验工作流程摘要（Naik 等人，2013）
最初建立了细胞条形码技术来解决在体内移植造血细胞后的单细胞动力学，并且近年来在移植中对血细胞群体中功能异质性的认识有显着贡献（Schepers ，2008; Gerrits等人，2010; Lu等人，2011; Naik等人 ，2013; Verovskaya等人，2013; ...
|
|
|
| VLA-4 Affinity Assay for Murine Bone Marrow-derived Hematopoietic Stem Cells
|
|
Author:
Date:
2017-02-20
[Abstract] Hematopoietic stem cells (HSCs) are defined by their functional ability to self-renew and to differentiate into all blood cell lineages. The majority of HSC reside in specific anatomical locations in the bone marrow (BM) microenvironment, in a quiescent non motile mode. Adhesion interactions between HSCs and their supporting BM microenvironment cells are critical for maintaining stem cell quiescence and protection from DNA damaging agents to prevent hematology failure and death. Multiple signaling proteins play a role in controlling retention and migration of bone marrow HSCs. Adhesion ...
[摘要] 造血干细胞（HSC）由其自我更新的功能能力定义，并分化成所有血细胞谱系。大多数HSC位于骨髓（BM）微环境中的特定解剖位置，处于静止非运动模式。 HSCs与其支持的BM微环境细胞之间的粘附相互作用对于维持干细胞静止和保护免受DNA损伤因子阻止血液学失败和死亡至关重要。多重信号蛋白在控制骨髓HSCs的保留和迁移中起重要作用。粘附分子参与调节造血和干细胞和祖细胞BM保留，迁移和发育的两个过程。干细胞从骨髓移动到骨髓的机制尚未完全阐明，仍然是深入研究的对象。一个重要的方面是修饰干细胞保留，迁移和发育所需的干细胞和祖细胞的粘附分子的表达和亲和力。粘附力通过粘附分子的表达，亲和力和亲合力来调节。亲和力调节与分子结合识别和结合强度有关。在这里，我们描述了在我们的研究中使用的体外 FACS测定来研究整联蛋白α4亚类β1亚单位的表达，亲和力和功能也称为VLA-4）用于小鼠骨髓保留EPCR +长期复制HSC（LT-HSC）（Gur-Cohen等人，2015）。背景整合素是介导细胞和细胞 - ...
|
|
|
| Adhesion Assay for Murine Bone Marrow Hematopoietic Stem Cells
|
|
Author:
Date:
2017-02-20
[Abstract] Hematopoietic stem cells (HSCs) are defined by their functional abilities to self-renew and to give rise to all mature blood and immune cell types throughout life. Most HSCs are retained in a non-motile quiescent state within a specialized protective microenvironment in the bone marrow (BM) termed the niche. HSCs are typically distinguished from other adult stem cells by their motility capacity. Movement of HSCs across the physical barrier of the marrow extracellular matrix and blood vessel endothelial cells is facilitated by suppression of adhesion interactions, which are essential to ...
[摘要] 造血干细胞（HSC）由其自我更新的功能定义，并在整个生命中产生所有成熟的血液和免疫细胞类型。大多数HSC在被称为利基的骨髓（BM）的专门的保护性微环境内保持在非运动性静止状态。 HSC通常通过其运动能力与其他成体干细胞区分开来。通过抑制粘附相互作用促进骨髓细胞外基质和血管内皮细胞的物理屏障的移动，这是保留在其BM细胞壁内保留的干细胞所必需的。重要的是，在临床移植后将HSC归巢到BM是重建消融BM的关键的第一步，就像血液恶性肿瘤治疗策略一样。归位过程结束于HSC的选择性访问和锚定到其在BM内的专门的位置。粘附分子是在干细胞移植的情况下增强归巢或减少BM保留以从匹配供体的血液中收集动员的HSC的靶标。在HSC上功能表达并参与其归巢和保留的主要粘附蛋白是整合素α4β1（非常晚的抗原-4; VLA4）。在该方案中，我们引入了针对表达VLA4的鼠骨髓干细胞优化的粘附测定。该测定法在分离表达VLA4的贴壁细胞后，通过流式细胞术与HSC富集细胞表面标记物定量粘附的HSC。
背景 HSCs主要保留在BM中，并通过与其微环境（niche）的粘合相互作用来调节。以这种方式，HSC保持在非运动性静止状态，保护它们免受DNA损伤代理（Boulais和Frenette，2015; Mendelson和Frenette，2014; ...
|
|
|