| Hair Follicle Stem Cell Isolation and Expansion
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Author:
Date:
2018-05-20
[Abstract] Stem cells are widely used for numerous clinical applications including limbal stem cell deficiency. Stem cell derived from the bulge region of the hair follicle have the ability to differentiate into a variety of cell types including interfollicular epidermis, hair follicle structures, sebaceous glands and corneal epithelial cells when provided the appropriate cues. Hair follicle stem cells are being studied as a valuable source of autologous stem cells to treat disease. The protocol described below details the isolation and expansion of these cells for eventual clinical application. We used ...
[摘要] 干细胞被广泛用于许多临床应用，包括角膜缘干细胞缺陷。 当提供适当的提示时，源自毛囊凸出区域的干细胞具有分化成多种细胞类型的能力，包括滤泡间表皮，毛囊结构，皮脂腺和角膜上皮细胞。 正在研究毛囊干细胞作为自体干细胞治疗疾病的宝贵来源。 下面描述的方案详细描述了这些细胞的最终临床应用的分离和扩增。 我们使用双报告小鼠模型来观察这些细胞在角膜缘干细胞缺陷小鼠模型中的分离和最终分化。
【背景】干细胞被广泛用于多种翻译和临床应用。一种这样的临床应用是用于治疗角膜缘干细胞缺陷（LSCD）。当角膜缘干细胞群存在功能障碍或丧失时，LSCD发生，这对于由于先天性或获得性病理而维持健康的眼表非常重要。 LSCD的主要治疗策略是从患者健康眼睛的角膜缘活检组织培养自体上皮细胞片（Pellegrini等人，1997; Shortt等人，2007） 。这种策略的局限性在于它只适用于患有单侧LSCD的患者。那些有双侧LSCD的患者必须依靠免疫相关活体供体或尸体组织的同种异体角膜缘活检。由于全身性免疫抑制治疗的需要和供体组织的有限可用性，治疗成功率降低。一些研究小组一直在研究使用培养的口腔粘膜细胞治疗LSCD并取得了一些成功。然而，这些细胞通常不能表达角膜上皮分化标记角蛋白12（Inatomi等，2006），并且经常导致外周血管新生的发展（Nakamura等人， ，2004; ...
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| Murine Hair Follicle Derived Stem Cell Transplantation onto the Cornea Using a Fibrin Carrier
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Author:
Date:
2018-05-20
[Abstract] The goal of this protocol is to establish a procedure for cultivating stem cells on a fibrin carrier to allow for eventual transplantation to the eye. The ability to transfer stem cells to a patient is critical for treatment for a variety of disorders and wound repair. We took hair follicle stem cells from the vibrissae of transgenic mice expressing a dual reporter gene under the control of the Tet-on system and the keratin 12 promoter (Meyer-Blazejewska et al., 2011). A clonal growth assay was performed to enrich for stem cells. Once holoclones formed they were transferred onto a ...
[摘要] 该方案的目标是建立一种在纤维蛋白载体上培养干细胞以允许最终移植到眼睛的程序。 将干细胞转移给患者的能力对于治疗各种疾病和伤口修复至关重要。 我们在Tet-on系统和角蛋白12启动子（Meyer-Blazejewska等人，2011）的控制下从表达双报告基因的转基因小鼠的触须中取出毛囊干细胞。 进行克隆生长测定以富集干细胞。 一旦形成holoclones，将它们转移到纤维蛋白载体上并培养以获得融合上皮细胞层。 将角膜缘干细胞缺陷（LSCD）小鼠用作移植受体以测试移植成功和最终分化为角膜上皮表型。
【背景】干细胞被广泛用作治疗工具，因此递送手段是必不可少的。实际上，许多研究人员和公司正在寻找将细胞输送到人体内以优化细胞存活以及整合到宿主组织中的最佳方式。注射方法已广泛用于动物模型，但往往导致生存和整合差。目前正在使用利用生物材料和手术装置的技术。一种用于输送干细胞的技术是纤维蛋白载体。纤维蛋白凝胶是可降解的生物聚合物，其可粘附于允许细胞附着，迁移和增殖的天然组织（Ehrbar et al。，2005）。纤维蛋白凝胶具有许多优点，包括生物相容性，受控降解（Kjaergard等人，1994; Sidelmann等人，2000），均匀细胞分布和高细胞接种效率（Swartz ，2005）。已经将纤维蛋白凝胶用于治疗皮肤烧伤（Pellegrini等人，1999; ...
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| Automated Tracking of Root for Confocal Time-lapse Imaging of Cellular Processes
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Author:
Date:
2017-04-20
[Abstract] Here we describe a protocol that enables to automatically perform time-lapse imaging of growing root tips for several hours. Plants roots expressing fluorescent proteins or stained with dyes are imaged while they grow using automatic movement of the microscope stage that compensates for root growth and allows to follow a given region of the root over time. The protocol makes possible the image acquisition of multiple growing root tips, therefore increasing the number of recorded mitotic events in a given experiment. The protocol also allows the visualization of more than one fluorescent ...
[摘要] 在这里，我们描述一个协议，可以自动执行增长根尖的延时成像几个小时。表达荧光蛋白或用染料染色的植物根据显影阶段的自动移动而成像，其补偿根生长，并允许随着时间跟随根部的给定区域。该协议使图像采集多个生长根尖成为可能，因此增加了给定实验中记录的有丝分裂事件的数量。该协议还允许多个荧光蛋白或染料同时显示，使用多通道采集。我们特别关注在拟南芥根尖分生组织中细胞分裂的成像，但是这种方案也适用于在各种植物物种中追随根毛发生长，花粉管生长和其他根部区域。也可以修改为自动跟踪非植物结构的根尖增长。
细胞因子是细胞分裂的最后一步，当母细胞细胞质在两个子细胞之间分配（Lipka等人，2015）时。在植物中，通过分裂平面中的细胞板的离心扩张实现，其最终成为经历有丝分裂的细胞之间的新合成的细胞壁（Buschmann和Zachgo，2016;Müller和Jürgens，2016）。植物细胞嵌入僵硬的细胞壁，不能迁移。因此细胞分裂与伸长的取向对于器官形态发生至关重要。根分生组织是研究细胞分裂的一个很好的模型，因为它们容易适用于显微技术，而不需要解剖。然而，进行细胞分裂的根长度增长，因此需要随时间手动调整观察场。该协议允许容易地延迟细胞分裂成像和其他细胞过程。
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