|
Author:
Date:
2017-02-20
[Abstract] CRISPR/Cas9-mediated genome editing relies on a guide RNA (gRNA) molecule to generate sequence-specific DNA cleavage, which is a prerequisite for gene editing. Here we establish a method that enables production of gRNAs from any promoters, in any organisms, and in vitro (Gao and Zhao, 2014). This method also makes it feasible to conduct tissue/cell specific gene editing.
[摘要] CRISPR / Cas9介导的基因组编辑依赖于指导性RNA（gRNA）分子来产生序列特异性DNA切割，这是基因编辑的前提条件。在这里，我们建立了一种能够从任何启动子，任何生物体内和体外生产gRNA的方法（Gao和Zhao，2014）。该方法也可以进行组织/细胞特异性基因编辑。
背景 几乎所有报道的CRISPR介导的基因编辑病例都使用小核RNA如U6和U3 snRNA启动子的启动子来驱动体内生产gRNAs（Cong等人，2013; Mali等人，2013）。然而，U6和U3启动子有几个主要的局限性：1）它们是组成型活性的，不可调谐的; 2）它们缺乏细胞/组织特异性; 3）它们在许多生物体中没有明确定义; 4）U6需要G和U3需要A用于转录起始，从而限制目标选择; 5）由于缺乏商业RNA聚合酶III，它们不适合体外转录。不幸的是，构成大部分特征启动子的RNA聚合酶II启动子不能直接用于体内的gRNA生产，原因如下：1）RNA聚合酶II启动子的主要转录物经历广泛的加工如5'-端封端，3'末端聚腺苷酸化和拼接出内含子。一些修饰可能使设计的gRNA无功能。 2）将成熟的RNA分子转运到细胞质中;因此它们与位于细胞核中的预期目标物理分离。这就是为什么使用U6和U3 ...
|