| Protocol for HeLa Cells Infection with Escherichia coli Strains Producing Colibactin and Quantification of the Induced DNA-damage
|
|
Author:
Date:
2017-08-20
[Abstract] Strains of Escherichia coli bearing the pks genomic island synthesize the genotoxin colibactin. Exposure of eukaryotic cells to E. coli producing colibactin induces DNA damages, ultimately leading to cell cycle arrest, senescence and death. Here we describe a simple method to demonstrate the genotoxicity of bacteria producing colibactin following a short infection of cultured mammalian cells with pks+ E. coli.
[摘要] 具有pks基因组岛的大肠杆菌菌株合成基因毒素大肠杆菌素。 将真核细胞暴露于产生大肠杆菌的大肠杆菌诱导DNA损伤，最终导致细胞周期停滞，衰老和死亡。 在这里，我们描述了一种简单的方法来证明在用pks +大肠杆菌培养的哺乳动物细胞的短时间感染后，产生大肠杆菌素的细菌的遗传毒性。
【背景】大肠杆菌素是在大肠杆菌的肠外致病，共生和益生菌菌株中发现的基因毒素（Nougayrede等，2006）。大肠杆菌素也由其他肠杆菌科产生，包括肺炎克雷伯杆菌，产气肠杆菌和柠檬酸杆菌（Putze等人，2009）。大肠杆菌素是通过由多酮酶和非核糖体肽合酶（PKS和NRPS），定制和成熟酶以及外排泵组成的多酶机械合成的聚酮化合物/非核糖体肽杂化化合物（综述：Taieb等人。，2016）。该合成机制编码在52kb的基因组，即'pks'岛上。 Colibactin在感染pks +细菌的真核细胞中诱导DNA损伤。由大肠杆菌素诱导的遗传毒性作用需要活的pks +细菌与真核细胞的直接接触。事实上，杀死的细菌或细菌上清液或裂解物没有观察到遗传毒性作用。因此，为了证明产生大肠杆菌的大肠杆菌的基因毒性，培养的哺乳动物细胞（例如HeLa细胞）在4小时内用活的pks ...
|
|
|
| Purification of N-coronafacoyl Phytotoxins from Streptomyces scabies
|
|
Author:
Date:
2017-04-05
[Abstract] This procedure is used for large-scale purification of N-coronafacoyl phytotoxins that are produced by the potato common scab pathogen Streptomyces scabies. The procedure employs organic extraction of S. scabies culture supernatants under alternating basic and acidic conditions in order to preferentially isolate the phytotoxin - containing carboxylic acid fraction of the supernatant. Preparative thin layer chromatography and semi-preparative reverse phase - high performance liquid chromatography are then used to further purify the individual N-coronafacoyl ...
[摘要] 该方法用于大规模纯化由马铃薯常见的痂病原体耻骨链球菌sc疮产生的N， - 海胆酰基植物毒素。 该方法采用有机萃取方法。 在交替的碱性和酸性条件下培养上清液以优先分离含有上清液的含有毒素的羧酸部分。 然后使用制备型薄层色谱法和半制备型反相 - 高效液相色谱法进一步纯化所需的单独的N， - 焦油酰甲酰植物毒素。
马铃薯普通痂病是由革兰氏阳性，丝状，链霉菌属的土壤细菌引起的经济上重要的作物病。第一个描述和最好的特征是痂病引起链霉菌属（Streptomyces spp。）是具有全球分布（Bignell等人，2010）的Streptomyces scabies （syn。 S。scabiei 。目前常见的痂病治理方法包括作物轮作，灌溉和土壤熏蒸;然而，这些策略经常失败，产生不一致的结果或者环境不友好（Dees和Wanner，2012）。为了开发更好的疾病控制策略，我们必须首先了解 S使用的分子机制。 sc疮感染植物并诱发疾病症状。研究表明，S的能力。引起疾病的sc疮是由于在感染过程中产生不同作用的毒力因子。在由s生产的已知或潜在的毒力因子中。 sc疮是植物毒素的家族，被称为具有类似于植物激素茉莉酸的可能起到抑制作用的 N - 角鲨烯酰植物毒素（也称为COR-样代谢产物）病原体感染期间的植物免疫应答（Bignell等人，2010; ...
|
|
|
| An HPLC-based Method to Quantify Coronatine Production by Bacteria
|
|
Author:
Date:
2017-03-05
[Abstract] Coronatine is a polyketide phytotoxin produced by several pathovars of the plant pathogenic bacterium Pseudomonas syringae. It is one of the most important virulence factors determining the success of bacterial pathogenesis in the plant at both epiphytic and endophytic stages of the disease cycle. This protocol describes an optimized procedure to culture bacterial cells for coronatine production and to quantify the amount of coronatine secreted in the culture medium using an HPLC-based method.
[摘要] 冠心病是由植物病原菌的几种病原体产生的聚酮化合物植物毒素。它是在疾病周期的附生和内生期阶段确定植物细菌发病机制成功的最重要的毒力因素之一。该方案描述了用于培养用于冠状病毒产生的细菌细胞的优化方法，并且使用基于HPLC的方法定量培养基中分泌的冠状动脉的量。
背景 Coronatine（COR）是有效的细菌植物毒素，是植物激素茉莉酮酸-L异亮氨酸（JA-Ile）的分子模拟物。因此，COR激活茉莉酸（JA）信号传导，诱导JA响应基因，并拮抗免疫信号水杨酸的作用。 COR由两种成分组成：冠心病（CFA）和冠状氨酸（CMA）。编码CMA和CFA生物合成的基因在细菌中不是组成型表达的。相反，当细菌在诱导培养基中生长时，这些基因在植物叶片表面或植物体内或/或体外诱导（Palmer和Bender，1993; Panchal等等，2016）。本文介绍了从Panchal等人改编的方法。 （2016），以确定细菌产生冠心病的能力，可用作毒性指征。
|
|
|