| Quantitative Determination of Poly-β-hydroxybutyrate in Synechocystis sp. PCC 6803
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Author:
Date:
2017-07-20
[Abstract] Cyanobacteria synthesize a variety of chemically-different, high-value biopolymers such as glycogen (polyglucose), poly-β-hydroxybutyrate (PHB), cyanophycin (polyamide of arginine and aspartic acid) and volutin (polyphosphate) under excess conditions. Especially under unbalanced C to N ratios, glycogen and in some cyanobacterial genera also PHB are massively accumulated in the progression of the general nitrogen stress response. Several different technologies have been established for in situ and in vitro PHB analysis from different microbial sources. In this ...
[摘要] 蓝细菌合成各种化学上不同的高价值生物聚合物，如糖原（polyglucose），poly-β-β-羟基丁酸酯（PHB），蓝藻素（精氨酸和天冬氨酸的聚酰胺）和挥发物（多磷酸盐） 在超额条件下。 特别是在不平衡的C至N比下，糖原和一些蓝藻属中，PHB在一般氮应激反应进程中大量积累。 已经针对不同微生物来源的原位实验和/或从体外分析，建立了几种不同的技术。 在该协议中，描述了用于蓝藻（Stechocystis）的PHB定量的快速可靠的分光光度法。 如（Damrow等人，2016）中描述的氮缺乏的PCC 6803。
【背景】非重氮营养蓝细菌，例如集胞藻（Synechocystis） PCC 6803通过漂白来解决缺乏组合的氮源，这是一种被称为褪绿的过程（Allen和Smith，1969）。这种驯化反应的特征在于四个主要的结构和形态变化：（i）类囊体层之间的电子致密糖原夹杂物（直径约40nm）的大量积累伴随着（ii）藻糖酵母天线复合物的降解， （iii）类囊体膜层的拆卸，包括数量减少和包装密度，和（iv）形成不同的电子透明PHB颗粒（直径约400-500nm）（Damrow等人，2016）。由于不存在分解代谢酶和PHB缺陷型突变体的明显表型，所以在几种物种中合成的蓝细菌PHB代谢的生理功能是相当不透明的（Beck等人，2012; van ，2010; Damrow等人，2016; ...
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| Phototaxis Assays of Synechocystis sp. PCC 6803 at Macroscopic and Microscopic Scales
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Author:
Date:
2017-06-05
[Abstract] Phototaxis is a mechanism that allows cyanobacteria to respond to fluctuations in the quality and quantity of illumination by moving either towards or away from a light source. Phototactic movement on low concentration agar or agarose plates can be analyzed at macroscopic and microscopic scales representing group behavior and single cell motility, respectively. Here, we describe a detailed procedure for phototaxis assays on both scales using the unicellular cyanobacterium Synechocystis sp. PCC 6803.
[摘要] Phototaxis是允许蓝细菌通过朝向或远离光源移动来响应照明质量和数量的波动的机制。分别在低浓度琼脂或琼脂糖平板上的光镜移动可以分别表示组织行为和单细胞运动性的宏观和微观尺度。在这里，我们描述了使用单细胞蓝细菌集胞藻的两种鳞片上的光趋化测定的详细程序。 PCC 6803。
背景 模型生物 Synechocystis sp。 PCC 6803使用伸缩型IV皮脂（T4P）以潮汐表面移动，称为抽动动力。两个分泌的ATP酶（PilB和PilT）负责扩增和缩回菌毛装置，从而将细胞向前拉。集胞藻 sp。 PCC 6803拥有覆盖整个可见光谱的各种光感受器。光的吸收可以根据波长和强度刺激正或负光趋向性。最近，已经证明，单细胞集胞藻 PCC 6803能够通过将光聚焦在远侧的尖锐焦点上来直接检测单向照明（Schuergers等人，2016）。此外，显示抽动运动的方向与运动ATPase PilB的特定近端定位相关（Schuergers等人，2015）。提出了一种模型，即聚焦导致对运动装置的局部抑制，从而确定单个细胞作为远离焦点的光电响应的移动方向（Schuergers等人，2016） ）。
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| Multiplexed GuideRNA-expression to Efficiently Mutagenize Multiple Loci in Arabidopsis by CRISPR-Cas9
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Author:
Date:
2017-03-05
[Abstract] Since the discovery of the CRISPR (clustered regularly interspaced short palindromic repeats)-associated protein (Cas) as an efficient tool for genome editing in plants (Li et al., 2013; Shan et al., 2013; Nekrasov et al., 2013), a large variety of applications, such as gene knock-out, knock-in or transcriptional regulation, has been published. So far, the generation of multiple mutants in plants involved tedious crossing or mutagenesis followed by time-consuming screening of huge populations and the use of the Cas9-system appeared a promising method to overcome ...
[摘要] 自从发现CRISPR（聚集的定期交织的短回文重复） - 相关蛋白（Cas）作为植物基因组编辑的有效工具（Li等人，2013; Shan等人已经出版了诸如基因敲除，敲入或转录调控等各种各样的应用，例如，2013; Nekrasov等人，2013）。到目前为止，植物中多种突变体的产生涉及繁琐的杂交或诱变，随后大量人群的耗时筛选，Cas9系统的使用似乎是有希望的方法来克服这些问题。我们设计了一种二元载体，其结合了在拟南芥UBIQUITIN10（UBQ10）启动子和引导RNA（gRNA）控制下的优化的化脓性链球菌（Caspase）密码子的编码序列）由 A驱动的表现盒。拟南芥U6 - 启动子，用于在拟南芥中进行有效的多重编辑（阎等人，2016年）。在这里，我们描述了一个逐步的方案，以经济有效的方式生成含有多个gRNA的二元载体和基于经典克隆方法的Cas9核酸酶。背景 RNA引导的Cas9系统源于针对外源DNA的细菌防御系统（Sorek等人，2013）。由于其高效率，易于处理和多重编辑的可能性，已经被认为是基因组编辑的选择方法。通常，Cas9基因编辑系统涉及单个合成RNA分子，其指导Cas9蛋白质靶向所需DNA位点以进行基因组修饰或转录控制的gRNA。 gRNA-Cas9复合物通过gRNA-DNA配对识别靶向的DNA，并需要存在原始相邻基序（PAM）。 ...
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