| Using xCELLigence RTCA Instrument to Measure Cell Adhesion
|
|
Author:
Date:
2017-12-20
[Abstract] Cell adhesion to neighbouring cells and to the underlying extracellular matrix (ECM) is a fundamental requirement for the existence of multicellular organisms. As such, the formation, stability and dissociation of cell adhesions are subject to tight control in space and time and perturbations within the sophisticated adhesion machinery are associated with a variety of human pathologies. Here, we outline a simple protocol to monitor alterations in cell adhesion to the ECM, for example, following genetic manipulations or overexpression of a protein of interest or in response to drug treatment, ...
[摘要] 细胞与相邻细胞和基础细胞外基质（ECM）的粘附是多细胞生物存在的基本要求。 因此，细胞粘附的形成，稳定和解离在时间和空间上受到严格的控制，复杂的粘附机制内的干扰与各种人类病理有关。 在这里，我们概述了一个简单的协议，以监测细胞粘附到ECM的变化，例如，在遗传操作或目标蛋白的过表达或响应药物治疗后，使用xCELLigence实时细胞分析（RTCA）系统。
【背景】负责细胞粘附到下面的ECM的主要分子是称为整联蛋白的跨膜异二聚体受体家族。整合素的激活和与ECM的结合触发向整合素胞质尾部募集大量信号传导，支架和细胞骨架蛋白。总之，这些粘附成分代表了负责调节许多重要细胞过程（包括细胞增殖，存活，迁移和分化）的复杂且高度动态的机制。与维持正常生理功能的重要角色一致，整合素介导的粘附和信号传导失调是许多人类疾病（包括出血性疾病，心血管疾病和癌症）发病的先导（Giancotti and Ruoslahti，1999;Bökeland Brown，2002; Huveneers and Danen，2009; Legate等人，2009; Bouvard等人，2013; Calderwood等人，2013; Horton等人，等，2015; Seguin等，，2015）。因此，整合素依赖性细胞 - 细胞外基质粘附的研究是一个研究热点，也是许多生物学领域广泛关注的课题。 ...
|
|
|
| Xenograft Mouse Model of Human Uveal Melanoma
|
|
Author:
Date:
2017-11-05
[Abstract] Uveal melanoma (UM) is a malignant intraocular tumor in adults. Metastasis develops in almost half of the patients and over 90% of the metastases are in the liver. With the advances in molecular targeting therapy for melanoma, a proper metastasis animal model is of increasing importance for testing the accuracy and effectiveness of systemic therapies. Here, we describe a xenograft model for mimicking human UM liver metastasis by injecting human UM cells into the vitreous cavity in nude mice. The athymic nude mice are immunocompromised and suitable for xenograft tumor growth and metastasis, ...
[摘要] 葡萄膜黑色素瘤（UM）是成人中的恶性眼内肿瘤。 几乎一半的患者发生转移，90％以上的转移灶位于肝脏。 随着分子靶向治疗黑色素瘤的进展，正确的转移动物模型对于检测全身治疗的准确性和有效性越来越重要。 在这里，我们描述了一个模仿人类UM肝转移的异种移植模型，通过将人类UM细胞注入裸鼠的玻璃体腔中。 无胸腺裸鼠具有免疫功能低下，适合异种移植瘤的生长和转移，在双眼镜下，玻璃体内注射细胞更快，更容易手术，因此简单有效地检测人类的UM生长和转移。
【背景】UM是成人中最常见的原发性眼内肿瘤，发病率在世界范围内为5至10个/百万（Singh et al。，2011）。几乎一半的患者在初始诊断即使在治疗或/和移除原发性肿瘤后15年内也发生转移（Kujala等人，2003; Weis等人， 2016）。在超过4％的患者中，诊断时已经存在微转移（Finger等人，2005）。这个数字可能会被低估，因为早期的UM检测的限制。目前的药物治疗，例如眼球摘除术，斑块近距离放疗，质子束照射已经成功地去除或抑制早期的局灶性眼内UMs（Dogrusoz等人，2017）。但是一般来说，UM对标准的化学疗法具有抗性，迄今为止还没有有效的全身治疗可用于转移性病变（Goh和Layton，2016; ...
|
|
|
| Knock-in Blunt Ligation Utilizing CRISPR/Cas9
|
|
Author:
Date:
2017-03-05
[Abstract] The incorporation of the CRISPR/Cas9 bacterial immune system into the genetic engineering toolbox has led to the development of several new methods for genome manipulation (Auer et al., 2014; Byrne et al., 2015). We took advantage of the ability of Cas9 to generate blunt-ended double-strand breaks (Jinek et al., 2012) to introduce exogenous DNA in a highly precise manner through the exploitation of non-homologous end-joining DNA repair machinery (Geisinger et al., 2016). This protocol has been successfully applied to traditional immortalized cell lines and ...
[摘要] 将CRISPR / Cas9细菌免疫系统并入基因工程工具箱已经导致了几种用于基因组操作的新方法的开发（Auer等人，2014; Byrne等人，2015）。我们利用Cas9产生平端双链断裂的能力（Jinek等人，2012），以高度精确的方式通过开发非同源末端引物来引入外源DNA，加入DNA修复机械（Geisinger等人，2016）。该方案已成功应用于传统的永生化细胞系和人诱导多能干细胞。在这里，我们提出了使用HEK293细胞作为例子的敲入钝性连接的一般化方案。
背景 当我们概念化敲门钝性结扎（Geisinger等人，2016）时，开发用于CRISPR / Cas9的绝大多数方法都集中在提高同源重组的效率。然而，有一个例外：在斑马鱼中开发的同源性独立的基于质粒的敲入方法（Auer等人，2014）。这种方法，如敲入钝性连接，依赖于典型的非同源末端连接的机制，以线性化的，平端的双链DNA片段以高精度插入到基因组双链断裂中，核苷酸损失最小。这两种方法类似于为锌指核酸酶和被称为专性连接门控重组的TALEN开发的方法（ObLiGaRe; Maresca等人，2013），其依赖于产生相容的突出端以促进将靶DNA插入基因组。 ...
|
|
|