| Simultaneous Imaging of Single Protein Size, Charge, and Binding Using A Protein Oscillation Approach
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Author:
Date:
2021-03-05
[Abstract] Electrophoresis and Western blot are important tools in protein research for detection and identification of proteins. These traditional techniques separate the proteins based on size and charge differences and identify the proteins by antibody binding. Over the past decade, the emergence of single-molecule techniques has shown great potential in improving the resolution of the traditional protein analysis methods to the single-molecule level. However, such single-molecule techniques measure either size or charge, and it is challenging to measure both at the same time. Recently, we have ...
[摘要] [摘要]电泳和蛋白质印迹是蛋白质研究中用于检测和鉴定蛋白质的重要工具。这些传统技术根据大小和电荷差异分离蛋白质，并通过抗体结合鉴定蛋白质。Ø版本在过去的十年中，单分子技术的出现显示了将传统蛋白质分析方法的分辨率提高到单分子水平的巨大潜力。然而，这样的单分子技术测量大小或电荷，并且同时测量这两者是挑战性的。最近，我们已经开发出一种单分子方法来解决这个问题。我们使用聚合物接头将单个蛋白质束缚在表面上，并通过电场驱动它们振荡。通过使用光学成像方法跟踪蛋白质对电场的机电响应，可以同时获得大小和电荷。抗体或离子与拴系蛋白的结合也会改变大小和电荷，这使我们能够探查相互作用。该协议包括蛋白质振荡器的制造，光学检测系统的配置以及用于定量蛋白质大小和电荷的振荡信号的分析。我们希望该协议将使研究人员能够在单个平台上执行全面的单蛋白分析。
[背景]蛋白质在许多生物学过程的发挥重要作用，并作为药物靶标和生物标志物。蛋白质分析依赖于电泳，蛋白质印迹和质谱等技术，这些技术根据蛋白质分子的大小和电荷来分离和鉴定蛋白质。尽管这些技术在检测蛋白质方面功能强大，但它们对阐明分子异质性和精确诊断所必需的单个分子不敏感。最近，已经开发了几种单分子技术来测量单个生物分子的大小或电荷。实例包括：i nterferometric散射显微镜（iSCAT ...
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| Peroxisome Motility Measurement and Quantification Assay
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Author:
Date:
2017-09-05
[Abstract] Organelle movement, distribution and interaction contribute to the organisation of the eukaryotic cell. Peroxisomes are multifunctional organelles which contribute to cellular lipid metabolism and ROS homeostasis. They distribute uniformly in mammalian cells and move along microtubules via kinesin and dynein motors. Their metabolic cooperation with mitochondria and the endoplasmic reticulum (ER) is essential for the β-oxidation of fatty acids and the synthesis of myelin lipids and polyunsaturated fatty acids. A key assay to assess peroxisome motility in mammalian cells is the expression of a ...
[摘要] 细胞器运动，分布和相互作用有助于真核细胞的组织。过氧化物酶体是有助于细胞脂质代谢和ROS稳态的多功能细胞器。它们在哺乳动物细胞中均匀分布，并通过驱动蛋白和动力蛋白电动机沿微管移动。他们与线粒体和内质网（ER）的代谢合作对脂肪酸的β-氧化和髓鞘脂质和多不饱和脂肪酸的合成至关重要。评估哺乳动物细胞中过氧化物酶体运动性的关键测定是具有过氧化物酶体靶向信号（例如GFP-PTS1）的荧光融合蛋白的表达，其靶向过氧化物酶体基质并允许过氧化物酶体的活细胞成像。在这里，我们首先提出了用过氧化物酶体标记物EGFP-SKL转染培养的哺乳动物细胞的方案，以观察活细胞中的过氧化物酶体。这种方法揭示了过氧化物酶体的不同运动行为和对过氧化物酶体膜动力学的新见解（Rapp等，1996; Wiemer等，1997; ...
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| Explant Methodology for Analyzing Neuroblast Migration
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Author:
Date:
2017-05-05
[Abstract] The subventricular zone (SVZ) in the mammalian forebrain contains stem/progenitor cells that migrate through the rostral migratory stream (RMS) to the olfactory bulb throughout adulthood. SVZ-derived explant cultures provide a convenient method to assess factors regulating the intermediary stage of neural stem/progenitor cell migration. Here, we describe the isolation of SVZ-derived RMS explants from the neonatal mouse brain, and the conditions required to culture and evaluate their migration.
[摘要] 哺乳动物前脑中的室下区（SVZ）含有在整个成年期间通过流行性流（RMS）迁移到嗅球的茎/祖细胞。 SVZ衍生的外植体培养提供了一种方便的方法来评估调节神经干/祖细胞迁移的中间阶段的因素。在这里，我们描述了SVZ衍生的RMS外植体从新生儿小鼠脑中的分离以及培养和评估其迁移所需的条件。
背景 成年哺乳动物前脑含有一个位于啮齿动物和人类侧脑室旁边的神经源性小生境，并被恰当地命名为室下区（SVZ）。在啮齿动物中，SVZ是细胞的薄的“楔形”，覆盖了侧脑室的整个壁（Mirzadeh等人，2010; Paez-Gonzalez等人。 ，2014; Dixon等人，2016）。在SVZ内，慢分化的星形胶质细胞样B细胞分化成快速分裂的C型神经祖细胞（也称为转运扩增细胞），其产生双皮层蛋白阳性的A型神经母细胞，尽管少突胶质细胞和星形胶质细胞也能够（Garcia-Verdugo等人，1998; Tavazoie等人，2008; Rikani等人，2013）。在啮齿动物中，每天估计有10,000到30,000个神经母细胞。这些成神经细胞在通过流行流体流（RMS）迁移到嗅球时形成链（Lois和Alvarez-Buylla，1994; ...
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