| Multiplex T-cell Stimulation Assay Utilizing a T-cell Activation Reporter-based Detection System
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Author:
Date:
2021-01-20
[Abstract] Immune tolerance and response are both largely driven by the interactions between the major histocompatibility complex (MHC) expressed by antigen presenting cells (APCs), T-cell receptors (TCRs) on T-cells, and their cognate antigens. Disordered interactions cause the pathogenesis of autoimmune diseases such as type 1 diabetes. Therefore, the identification of antigenic epitopes of autoreactive T-cells leads to important advances in therapeutics and biomarkers. Next-generation sequencing methods allow for the rapid identification of thousands of TCR clonotypes from single T-cells, and thus ...
[摘要] [摘要] 免疫耐受和应答都很大程度上由抗原呈递细胞（APC）表达的主要组织相容性复合物（MHC），T细胞上的T细胞受体（TCR）及其同源抗原之间的相互作用驱动。相互作用障碍导致自身免疫性疾病（例如1型糖尿病）的发病机理。因此，鉴定自身反应性T细胞的抗原表位导致治疗和生物标志物的重要进展。下一代测序方法可从单个T细胞快速鉴定数千种TCR克隆型，因此需要确定已鉴定TCR的同源抗原。该协议描述了T细胞活化的报告系统，其中荧光报告蛋白ZsGreen-1由活化T细胞的核因子（NFAT）信号驱动并通过流式细胞仪读取。记者T细胞也组成性表达额外的一对荧光素tein作为识别物，允许同时多路复用多达8种不同的报告T细胞系，每种表达不同的目标TCR，可通过流式细胞仪区分。一旦制成TCR表达细胞系，仅需一个转导步骤即可将其无限期用于制备新的T细胞系。这种多路复用系统允许筛选TCR-抗原相互作用的数量，否则这些相互作用将是不切实际的，可在多种情况下使用（即，筛选单个抗原或抗原库），并可用于研究任何T细胞-MHC-抗原三分子相互作用。
[背景] T细胞，抗原呈递细胞（APC）及其同源抗原之间的相互作用是自身免疫性疾病（例如1型糖尿病）的主要事件（Michels等，2017； ...
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| Improving CRISPR Gene Editing Efficiency by Proximal dCas9 Targeting
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Author:
Date:
2017-08-05
[Abstract] Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats (CRISPR) and CRISPR-associated (Cas) systems function as an adaptive immune system in bacteria and archaea for defense against invading viruses and plasmids (Barrangou and Marraffini, 2014). The effector nucleases from some class 2 CRISPR-Cas systems have been repurposed for heterologous targeting in eukaryotic cells (Jinek et al., 2012; Cong et al., 2013; Mali et al., 2013; Zetsche et al., 2015). However, the genomic environments of eukaryotes are distinctively different from that of prokaryotes in ...
[摘要] 集群定期间隔短回归重复（CRISPR）和CRISPR相关（Cas）系统作为细菌和古菌中的适应性免疫系统，用于防御入侵病毒和质粒（Barrangou和Marraffini，2014）。来自某些2类CRISPR-Cas系统的效应核酸酶已被重新用于真核细胞中的异源靶向（Jinek et al。，2012; Cong等人，2013; Mali ，2013; Zetsche等人，2015）。然而，真核生物的基因组环境与CRISPR-Cas系统发展的原核生物的基因组环境有明显的不同。发现哺乳动物异染色质是通过化脓性链球菌Cas9（SpCas9）靶向DNA接近的障碍，并且还发现染色质的基本单位的核小体阻碍了通过SpCas9的靶DNA进入和切割[ （Knight等人，，2015; Hinz等人，2015; Horlbeck等人，2016年） ; ...
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| Efficient Production of Functional Human NKT Cells from Induced Pluripotent Stem Cells − Reprogramming of Human Vα24+iNKT Cells
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Author:
Date:
2017-05-20
[Abstract] Antigen-specific T cell-derived induced pluripotent stem cells (iPSCs) have been shown to re-differentiate into functional T cells and thus provide a potential source of T cells that could be useful for cancer immunotherapy. Human Vα24+ invariant natural killer T (Vα24+iNKT) cells are subset of T cells that are characterized by the expression of an invariant Vα24-Jα18 paired with Vβ11, that recognize glycolipids, such as α-galactosylceramide (α-GalCer), presented by the MHC class I-like molecule CD1d. Vα24+iNKT cells capable of producing IFN-γ are reported to ...
[摘要] 抗原特异性T细胞来源的诱导多能干细胞（iPSCs）已显示重新分化为功能性T细胞，从而提供可用于癌症免疫治疗的T细胞的潜在来源。不变性自然杀伤T（Vα24 + iNKT）细胞的人Vα24 + 细胞是T细胞的子集，其特征在于与Vβ11配对的不变Vα24-Jα18的表达，其识别糖脂，如α-半乳糖神经酰胺（α-GalCer），由MHC I类分子CD1d呈递。据报道能够产生IFN-γ的Vα24 + i / KT细胞增加抗肿瘤反应，其影响NK细胞和CD8 +细胞毒性T淋巴细胞以消除MHC - 和MHC + 肿瘤细胞。在这里，我们描述了将人Vα24 + iNKT细胞重编程到iPSC中的鲁棒方案，然后将其重新分化为Vα24 + iNKT细胞（iPS-Vα24功能的iNKT）。我们进一步提供了测定iPS-Vα24 + iNKT细胞活性的方案。背景 以前有报道说，针对晚期非小细胞肺癌（NSCLC）和头颈部癌症的Vα24 + iNKT细胞癌免疫治疗的临床试验显示疗效，耐受性良好（Motohashi et al。等人，2009; Yamasaki等人，2011）。然而，已知来自外周血单核细胞（PBMC）的Vα24 ...
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