A Procedure for Precise Determination of Glutathione Produced by Saccharomyces cerevisiae
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Author:
Date:
2018-06-20
[Abstract] In bioproduction, yields of products must be calculated precisely for accurate evaluation of various fermentation conditions. To evaluate productivity of microorganisms, product amounts per unit of medium volume (e.g., mg-product/L-broth), and/or product amounts per unit of a microorganism amount (e.g., mg-product/mg-dry cell weight) are often used. Nonetheless, detailed procedures for calculation of these production yields are often omitted in research articles, whereas methods for product quantification are described well. Here, we describe a detailed calculation procedure ...
[摘要] 在生物生产中,必须精确计算产品的产量,以准确评估各种发酵条件。 为了评估微生物的生产力,每单位培养基体积的产物量(例如,mg-产物/ L-肉汤)和/或每单位微生物量的产物量(例如, ,毫克产品/毫克干细胞重量)经常使用。 尽管如此,在研究文章中常常忽略用于计算这些产量的详细程序,而产品量化的方法则被很好地描述。 在这里,我们描述了我们以前关于酿酒酵母产生谷胱甘肽的研究的详细计算过程。 该程序可以应用于各种其他产品和微生物,因此可能证明可用于各种其他生物生产研究。
【背景】谷胱甘肽是所有生物体中含量最高的含巯基三肽,并且作为在细胞中具有不同作用的生物活性物质起作用,例如作为氧化还原和解毒剂。因此,谷胱甘肽如今被广泛用于医疗,食品和化妆品行业,并且近年来需求增加。谷胱甘肽在工业上主要通过使用原始含有高浓度谷胱甘肽的酿酒酵母进行发酵生产,并且已经作为安全的食品生产微生物。对各种微生物中的微生物谷胱甘肽产生的研究在未来将变得更加重要。为了评估各种微生物发酵产生谷胱甘肽的效率,我们在这里描述了我们详细的样品制备程序,高效色谱(HPLC)定量还原和氧化谷胱甘肽的方法,以及两种产量的计算方法(Hara ) 2012; Hara等人,2015; Kiriyama等人,2013; Kobayashi等人 2017年)。
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zPACT: Tissue Clearing and Immunohistochemistry on Juvenile Zebrafish Brain
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Author:
Date:
2017-12-05
[Abstract] In studies of brain function, it is essential to understand the underlying neuro-architecture. Very young zebrafish larvae are widely used for neuroarchitecture studies, due to their size and natural transparency. However, this model system has several limitations, due to the immaturity, high rates of development and limited behavioral repertoire of the animals used.
We describe here a modified version of the passive clearing technique (PACT) (Chung et al., 2013; Tomer et al., 2014; Yang et al., 2014; Treweek et al., 2015), which facilitates ...
[摘要] 在脑功能研究中,了解潜在的神经结构是至关重要的。非常年轻的斑马鱼幼虫被广泛用于神经构造研究,由于它们的大小和自然透明度。然而,这个模型系统有一些局限性,由于使用的动物不成熟,发育率高,行为表现有限。
我们在这里描述了被动清除技术(PACT)的改进版本(Chung等人,2013; Tomer等人,2014; Yang等人, ,2014; Treweek et。,2015),这有助于大型水生物种标本的神经解剖学研究。这种方法最初是为斑马鱼(2017年)开发的( Danio rerio )(2017年;Frétaud等人,2017年; Mayrhofer等人,2017年; Xavier “)等人,2017),但也已经成功地在其他鱼类上进行了测试,如鲭鱼(Oryzias latipes )(Dambroise et al。,2017 ),墨西哥洞穴鱼( Astyanax mexicaus )和非洲斑马鱼(metriaclima zebra )以及其他水生物种,如非洲爪蟾属。 (非洲爪蟾热带非洲爪蟾)(Fini等人,2017)。该协议基于由Deisseroth实验室等开发和修改的CLARITY方法(Chung等人,2013; Tomer等人,2014; Yang等人,2014),适用于水生物种,特别是斑马鱼(zPACT)。
该协议旨在通过在聚丙烯酰胺/甲醛网状物中交联来保持组织的整体结构,使斑马鱼标本光学透明。然后通过SDS处理除去存在于样品中的大部分脂质,通过消除导致不透明的水/脂质界面处的光散射来均化样品的折射率。最后的清除步骤包括将样品在基于果糖的固定介质(衍生自SeeDB)(Ke等人,2013)中孵育,其折射率与物镜的折射率相匹配的显微镜。该技术与使用绿色荧光蛋白(GFP)在特定细胞群体中表达的转基因斑马鱼的组合提供了描述其他技术不可见的解剖细节的机会。 ...
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Purifying Properly Folded Cysteine-rich, Zinc Finger Containing Recombinant Proteins for Structural Drug Targeting Studies: the CH1 Domain of p300 as a Case Example
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Author:
Date:
2017-09-05
[Abstract] The transcription factor Hypoxia-Inducible Factor (HIF) complexes with the coactivator p300, activating the hypoxia response pathway and allowing tumors to grow. The CH1 and CAD domains of each respective protein form the interface between p300 and HIF. Small molecule compounds are in development that target and inhibit HIF/p300 complex formation, with the goal of reducing tumor growth. High resolution NMR spectroscopy is necessary to study ligand interaction with p300-CH1, and purifying high quantities of properly folded p300-CH1 is needed for pursuing structural and biophysical studies. ...
[摘要] 与共激活因子p300的转录因子缺氧诱导因子(HIF)复合物,激活缺氧反应途径并允许肿瘤生长。每个相应蛋白质的CH1和CAD结构域形成p300和HIF之间的界面。正在开发靶向和抑制HIF / p300复合物形成的小分子化合物,目的是减少肿瘤生长。研究配体与p300-CH1相互作用的高分辨NMR光谱是必要的,为了进行结构和生物物理学研究,需要净化大量正确折叠的p300-CH1。 p300-CH1具有3个锌指和9个半胱氨酸残基,构成与试剂相容性和蛋白氧化相关的挑战。已经开发了一种通过在表达过程中并入锌并简化纯化时间来克服这些问题的方案,导致适合于结构NMR研究的最佳折叠蛋白质(120mg / 4L表达介质)的高产率。已证实最终重组p300-CH1的结构完整性是使用一维1 H NMR光谱和圆二色性最优的。该方案适用于纯化其他含锌指蛋白质。 【背景】由于不适当的血管灌注,实体瘤的发展与缺氧区的发展有关。对于缺氧微环境,肿瘤细胞过表达低氧诱导因子(HIF),一种异二聚体转录因子家族(Semenza,2002; Brat和Van Meir,2004; Kaur等,2005)。 HIFs结合p300(一种转录共激活因子),形成诱导HIF靶基因的复合物,从而激活缺氧反应途径并促进肿瘤生长(Kasper and Brindle,2006; Liu,2008)。涉及HIF / p300蛋白 ...
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