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pH meter Basic 20
公司名称: HACH LANGE SPAIN
产品编号: Basic 20
Bio-protocol()
Company-protocol()
Other protocol()
Metal-tagging Transmission Electron Microscopy for Localisation of Tombusvirus Replication Compartments in Yeast
Author:
Date:
2018-04-20
[Abstract]  Positive-stranded (+) RNA viruses are intracellular pathogens in humans, animals and plants. To build viral replicase complexes (VRCs) viruses manipulate lipid flows and reorganize subcellular membranes. Redesigned membranes concentrate viral and host factors and create an environment that facilitates the formation of VRCs within replication organelles. Therefore, efficient virus replication depends on the assembly of specialized membranes where viral macromolecular complexes are turned on and hold a variety of functions. Detailed characterization of viral replication platforms in cells ... [摘要]  正链（+）RNA病毒是人，动物和植物中的细胞内病原体。构建病毒复制酶复合物（VRC）病毒操纵脂质流动和重组亚细胞膜。重新设计的膜集中了病毒和宿主因子，并创造了促进复制细胞器内VRC形成的环境。因此，有效的病毒复制取决于病毒大分子复合物开启并具有各种功能的特殊膜的组装。细胞中病毒复制平台的详细特征需要复杂的成像方法。在这里我们提出一个协议，用肉眼标记透射电子显微镜（METTEM）可视化酵母中的tombusvirus复制酶复合物的三维组织。该协议使我们能够用METTEM和电子断层扫描成像三维病毒复制酶分子的细胞内分布。我们的研究显示病毒复制酶分子如何在特化细胞膜内构建复制复合物。

【背景】正链RNA病毒的复制取决于细胞膜的重塑。细胞内膜作为VRC装配的结构支架，提供调节病毒复制酶活性和保护病毒RNA免受宿主抗病毒防御的必需脂质和辅因子（Miller和Krijnse-Locker，2008; den Boon <等，2010; nagy和pogany，2011;="" nagy，2016）。电子显微镜观察到具有活性vrc的复制细胞器的结构。="" vrc以单个膜囊或'小球'，管状球形立方体膜，双膜囊泡（dmv）或平面寡聚体阵列装配（de="" castro等人，2013）。通常在rna病毒感染的细胞中观察到小球。它们通过在各种细胞器中内陷而形成，并具有对胞质溶胶的狭窄开口（den="" boon="" et=""> ...

Isolation of Ribosomal Particles from the Unicellular Cyanobacterium Synechocystis sp. PCC 6803
Author:
Date:
2017-03-20
[Abstract]  Isolation of ribosomal particles is an essential step in the study of ribosomal components as well as in the analysis of trans-acting factors that interact with the ribosome to regulate protein synthesis and modulate the expression profile of the cell in response to different environmental conditions. In this protocol, we describe a procedure for the isolation of 70S ribosomes from the unicellular cyanobacterium Synechocystis sp. PCC 6803 (hereafter Synechocystis). We have successfully used this protocol in our study of the cyanobacterial ribosomal-associated ... [摘要]  核糖体颗粒的分离是研究核糖体组分以及与核糖体相互作用以调节蛋白质合成并调节细胞表达谱的反式因子的分析中必不可少的步骤响应不同的环境条件。在本协议中，我们描述了从单细胞蓝细菌集胞藻分离70S核糖体的过程。 PCC 6803（以下简称集胞藻）。我们已经成功地使用这个方案来研究蓝细菌核糖体相关蛋白LrtA，它是细菌HPF（冬眠促进因子）的同系物（Galmozzi等人，2016）。

背景 据报道蓝藻核糖体几乎没有生物化学研究。已经通过差速离心分离70S核糖体颗粒，然后通过二维电泳分析核糖体蛋白质（Sato et al。，et al。 ，1998）。核糖体也已经从聚球藻（Spechococcus）进行制备。 PCC 6301细胞使用组合差速离心和蔗糖步骤梯度的方案（Sugita等人，2000）。通过差速离心分离细胞提取物也被用于制备核糖体样品用于在不同的聚球藻菌株中开发体外翻译系统（Mutsuda和Sugiura，2006 ）。基于针对聚球藻（Sugita等人，2000）所述的方法，本文所述的针对集胞藻的方法允许使用以下方式纯化核糖体颗粒线性蔗糖梯度的超速离心。

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