| DQ-Red BSA Trafficking Assay in Cultured Cells to Assess Cargo Delivery to Lysosomes
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Author:
Date:
2017-10-05
[Abstract] Lysosomes are the terminal end of the endocytic pathway having acidic environment required for active hydrolases that degrade the cargo delivered to these compartments. This process of cargo delivery and degradation by endo-lysosomes is a tightly regulated process and important for maintaining cellular homeostasis. Cargos like EGF (Epidermal Growth Factor), Dil-LDL (3,3’-Dioctadecylindocarbocyanine-Low Density Lipoprotein), Dextran, DQ-BSA (Dye Quenched-Bovine Serum Albumin) etc., are routinely used by researchers to analyze the role of various proteins in endocytic pathway. ...
[摘要] 溶酶体是具有降解递送到这些隔室的货物的活性水解酶所需的酸性环境的内吞途径的末端。 这种内溶溶酶体的货物递送和降解过程是一个严格调节的过程，对于维持细胞体内平衡是重要的。 Cargos如EGF（表皮生长因子），Dil-LDL（3,3'-二十八碳基碳代花青 - 低密度脂蛋白），葡聚糖，DQ-BSA（染料淬灭 - 牛血清白蛋白）等常规 由研究人员用来分析各种蛋白质在内吞途径中的作用。 在缺乏或过表达感兴趣的基因的细胞中的DQ-BSA的贩运是用于鉴定各种蛋白质在内吞运输途径中的作用的有用测定。 该方案描述了可用于研究各种细胞类型的吞噬运输的DQ-Red BSA运输测定。
【背景】细胞不断地与其细胞外环境交换物质，并且在这个过程中，它们将货物内部化在质膜的囊泡中。这种内部货物被运送到早期的内体，从那里它可以通过再循环内体回到质膜或进入规范的内吞途径。一旦被注定要退化，货物就会移动到后期的内体，并最终与溶酶体融合，其中活性水解酶消化货物（Jovic等人，2010）。这些内吞室具有其内腔的特征pH。早期内体体内的pH值范围为5.9-6.8，晚期内体的pH范围为4.9-6.0，溶酶体最为酸性，pH范围为4.5-5.0（Maxfield和Yamashiro，1987）。溶酶体的酸性环境对于存在于其管腔中的水解酶和货物降解的活性是必需的（Garg等人，2011; ...
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| Isolation of Murine Alveolar Type II Epithelial Cells
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Author:
Date:
2017-05-20
[Abstract] We have optimized a protocol for isolation of alveolar type II epithelial cells from mouse lung. Lung cell suspensions are prepared by intratracheal instillation of dispase and agarose followed by mechanical disaggregation of the lungs. Alveolar type II epithelial cells are purified from these lung cell suspensions through magnetic-based negative selection using a Biotin-antibody, Streptavidin-MicroBeads system. The purified alveolar type II epithelial cells can be cultured and maintained on fibronectin-coated plates in DMEM with 10% FBS. This protocol enables specific investigation of ...
[摘要] 我们优化了从小鼠肺分离肺泡II型上皮细胞的方案。通过气管内滴注分泌酶和琼脂糖，然后机械解聚肺来制备肺细胞悬浮液。通过使用生物素抗体Streptavidin-MicroBeads系统的磁性阴性选择，从这些肺细胞悬液中纯化肺泡II型上皮细胞。可以将纯化的肺泡II型上皮细胞培养并维持在含有10％FBS的DMEM中的纤连蛋白包被的平板上。该方案能够在分子和细胞水平上对肺泡II型上皮细胞进行特异性研究，并提供了一种重要的工具，用于在体外研究肺发病机制的机制。
背景 肺泡II型上皮细胞在肺泡完整性维持，表面活性蛋白合成和分泌中起关键作用，并防止细菌和病毒的肺部感染。最近使用小鼠肺癌模型的研究已经证明，肺泡II型上皮细胞是由化学致癌物质和致癌突变诱导的腺瘤/腺癌的关键细胞（Qu 等人，2015; Zhou > et al。，2015和2017）。为了进一步扩大我们对肺泡II型上皮细胞在体内肺发病机制中的作用的理解，需要分离肺泡II型上皮细胞以允许体外精确的机理分析， EM>。基于先前的研究（Corti等人，1996; Rice等人，2002），在我们的实验室中使用了一种修饰的方法来分离高度纯化的，可行的和可培养的来自小鼠的肺泡II型上皮细胞（Zhou等人，2015; Sun等人，2016）。
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| Adoptive Transfer of Lung Antigen Presenting Cells
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Author:
Date:
2017-03-20
[Abstract] Our protocol describes adoptive transfer of antigen presenting cells (APCs) isolated from the lungs by enzymatic digestion and magnetic enrichment. This protocol can be used to study APC functions and trafficking.
[摘要] 我们的方案描述了通过酶消化和磁力富集从肺分离的抗原呈递细胞（APC）的过继转移。该协议可用于研究APC功能和贩运。
背景 包括巨噬细胞和树突状细胞（DC）在内的肺癌APC在感染侵袭性病原体，引发T细胞应答和控制耐受性反应中发挥关键作用。肺DC是稳定状态下最有效的专业APC，包括常规DC（cDC）和浆细胞样DC（pDC），以及炎症时新招募的单核细胞衍生的DC（moDC）（Kopf等人）。 ，2015）。肺静脉巨噬细胞，包括肺泡巨噬细胞，间质巨噬细胞和支气管巨噬细胞，在呈递抗原方面的效力较低。
＆nbsp;所有巨噬细胞和cDC在其细胞表面表达高水平的CD11c，而pDC表达中等水平的CD11c（Becher等，2014）。因此，CD11c磁性微珠可用于分离小鼠肺巨噬细胞和cDC。我们开发了一种从正常小鼠中分离肺APCs的方案，然后将其过渡转移到同基因骨髓移植小鼠。我们使用该方案来确定正常的肺APCs是否足以恢复移植后疱疹病毒感染的T辅助细胞极化（Zhou等人，2016）。
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