| Optic Nerve Crush in Mice to Study Retinal Ganglion Cell Survival and Regeneration
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Author:
Date:
2020-03-20
[Abstract] In diseases such as glaucoma, the failure of retinal ganglion cell (RGC) neurons to survive or regenerate their optic nerve axons underlies partial and, in some cases, complete vision loss. Optic nerve crush (ONC) serves as a useful model not only of traumatic optic neuropathy but also of glaucomatous injury, as it similarly induces RGC cell death and degeneration. Intravitreal injection of adeno-associated virus serotype 2 (AAV2) has been shown to specifically and efficiently transduce RGCs in vivo and has thus been proposed as an effective means of gene delivery for the treatment ...
[摘要] [摘要 ] 在青光眼等疾病中，视网膜神经节细胞（RGC）神经元无法存活或无法再生视神经轴突，这是部分视力丧失的原因，在某些情况下，甚至是完全的视力丧失。视神经挤压术（ONC）不仅可以作为创伤性视神经病变的一种有用模型，而且还可以作为青光眼损伤的有用模型，因为它类似地诱导RGC细胞死亡和变性。腺相关病毒血清型2（AAV2）的玻璃体内注射已被证明特别地和有效地转导视网膜神经节细胞在体内和已因而被提出作为基因递送用于治疗青光眼的治疗的有效手段。确实，我们和其他人常规使用AAV2来研究促进ONC 后RGC中神经保护和轴突再生的机制。本文中，我们描述了分步操作的方案，以测定AAV2介导的转导和ONC损伤后小鼠中RGC的存活和再生，包括1）玻璃体内注射AAV2病毒载体，2）视神经挤压，3）霍乱毒素B （CTB）标记再生轴突，4）视神经清除，5）视网膜平面免疫染色和6）定量RGC存活和再生。除了提供执行此协议所需的所有材料和程序详细信息之外，我们还强调了它比其他相似的已发表方法的优势，并提供了有用的技巧以确保其在任何现代实验室中都能如实复制。
[背景 ] 青光眼是世界范围内不可逆失明的主要原因，其特征是视网膜神经节细胞（RGCs）逐渐退化和丧失，这是构成连接视网膜与大脑的视神经的中央投射神经元（Quigley ，2011 ; Tham ...
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| Expression and Purification of the Cas10-Csm Complex from Staphylococci
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Author:
Date:
2017-06-05
[Abstract] CRISPR-Cas (Clustered regularly interspaced short palindromic repeats-CRISPR-associated proteins) is a class of prokaryotic immune systems that degrade foreign nucleic acids in a sequence-specific manner. These systems rely upon ribonucleoprotein complexes composed of Cas nucleases and small CRISPR RNAs (crRNAs). Staphylococcus epidermidis and Staphylococcus aureus are bacterial residents on human skin that are also leading causes of antibiotic resistant infections (Lowy, 1998; National Nosocomial Infections Surveillance, 2004; Otto, 2009). Many staphylococci possess Type ...
[摘要] CRISPR-Cas（聚集的定期间隔的短回文重复-CRISPR相关蛋白）是一类以序列特异性方式降解外来核酸的原核免疫系统。这些系统依赖于由Cas核酸酶和小型CRISPR RNA（crRNA）组成的核糖核蛋白复合物。表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌是人皮肤上的细菌居民，也是抗生素抗性感染的主要原因（Lowy，1998; National Nosocomial Infection Surveillance，2004; Otto，2009） 。许多葡萄球菌具有III型A CRISPR-Cas系统（Marraffini和Sontheimer，2008; Cao等人，2016），已被证明可预防质粒转移并防止病毒性捕食者（Goldberg这些生物体中，等等，2014; Hatoum-Aslan等人，2014; Samai等人，2015）。因此，在天然葡萄球菌背景中获得对这些系统的机械理解可以导致对影响这些病原体的进化和存活的因素的重要见解。 III-A型CRISPR-Cas系统编码称为Cas10-Csm的五亚单位效应复合物（Hatoum-Aslan等人，2013）。在这里，我们描述了一种用于表达和纯化Cas10-Csm的方法。表皮样背景或异源性S。金黄色葡萄球菌背景。该方法由两步纯化方案组成，包括Ni 2 + - ...
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| Murine Bronchoalveolar Lavage
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Author:
Date:
2017-05-20
[Abstract] A basic Bronchoalveolar lavage (BAL) procedure in mouse is described here. Cells and fluids obtained from BAL can be analyzed by Hema3-staining, immunostaining, Fluorescence-activated cell sorting (FACS), PCR, bicinchoninic acid protein assay, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), luminex assays, etc., to examine the immune cells, pathogens, proteins such as cytokines/chemokines, and the expression levels of inflammation-related and other genes in the cells. This will help to understand the underlying mechanisms of these lung diseases and develop specific and effective drugs.
[摘要] 这里描述了小鼠中基本的支气管肺泡灌洗（BAL）程序。可以通过Hema3染色，免疫染色，荧光激活细胞分选（FACS），PCR，二金鸡宁酸蛋白测定，酶联免疫吸附测定（ELISA），luminex检测等来分析从BAL获得的细胞和液体。 / em>，以检查免疫细胞，病原体，蛋白质如细胞因子/趋化因子，以及细胞中炎症相关基因和其他基因的表达水平。这将有助于了解这些肺部疾病的潜在机制，并开发具体有效的药物。
背景 支气管肺泡灌洗（BAL）是通常用于诊断肺部疾病（包括肺癌）的简单且典型的方法（Daubeuf和Frossard，2012）。它用于采样肺组分，以确定肺中的蛋白质组成，免疫细胞和病原体。肺部慢性炎症在肺癌起始和进展中起关键作用。为了阐明肺肿瘤发生的炎症的潜在机制，我们的实验室使用了一种基本的BAL方案来确定肺部免疫反应（Qu等人，2015; Zhou等）。 ，2015; Sun等人，2016; Zhou等人，2017）。
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