| Adhesion of Enteroaggregative E. coli Strains to HEK293 Cells
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Author:
Date:
2018-04-20
[Abstract] Enteroaggregative Escherichia coli (EAEC) is a recognized cause of acute diarrhea among both children and adults worldwide. EAEC strains are characterized by the presence of aggregative adherence fimbriae (AAF), which play a key role in pathogenesis by mediating attachment to the intestinal mucosa and by triggering host inflammatory responses. The aggregative adherence fimbria II (AAF/II) is the most important adherence factor of EAEC prototype strain 042 (EAEC042) to intestinal cells. Multiple receptors for AAF/II on epithelial cells have been identified including the transmembrane ...
[摘要] 肠道集聚性大肠杆菌（EAEC）是全球儿童和成人急性腹泻的公认原因。 EAEC菌株的特征在于存在聚集粘附菌毛（AAF），其通过介导与肠粘膜的附着和通过引发宿主炎症反应而在发病机制中起关键作用。 聚合粘附菌毛II（AAF / II）是EAEC原型菌株042（EAEC042）对肠细胞最重要的粘附因子。 已经鉴定了上皮细胞上AAF / II的多种受体，包括跨膜信号传导粘蛋白Muc1。 该协议描述了测量EAEC菌株对表达Muc1糖蛋白的HEK293细胞的依从性的方法。
【背景】EAEC是世界范围内地方性和流行性腹泻病的重要原因。尽管发展中国家儿童腹泻最常见，但EAEC还与免疫受损成人腹泻，旅行者和工业化国家的食源性疾病有关，例如由志贺毒素（Stx）2a型产生的大致致命爆发2011年在北欧的血清型O104：H4的EAEC菌株（Harrington等人，2006; Rasko等人，2011）。 EAEC发病机制由生物体粘附肠细胞，产生肠毒素和细胞毒素并最终诱导炎症的能力决定（Harrington等，2006）。 EAEC对肠细胞的依从性由AAF菌毛粘附素介导（Czeczulin等人，1997）。迄今为止，已经描述了至少5种AAF菌毛的变体，全部编码在范围为55至65MDa的毒力质粒中（Jonsson等人，2015）。 ...
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| Resin-embedded Thin-section Immunohistochemistry Coupled with Triple Cellular Counterstaining
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Author:
Date:
2017-04-05
[Abstract] This protocol was developed to study protein localisation within the vascular bundles of developing tomato fruit however, it can be applied to any resin embedded plant tissue. The vascular bundle is comprised of many different cells that all have unique properties. The mature sieve elements are enucleated and contain sieve plates that comprise of callose. This method has utilised these properties of the sieve element by combining immunohistochemistry for cell wall invertase with counterstaining of aniline blue for callose, DAPI for nucleus and cell structure is shown with the final staining ...
[摘要] 该方案被开发用于研究番茄果实的维管束内的蛋白质定位，但可应用于任何树脂嵌入植物组织。 血管束由许多不同的细胞组成，它们都具有独特的特性。 成熟的筛分元素被去核并含有包含胼lose质的筛板。 该方法通过将细胞壁转化酶的免疫组织化学与苯胺蓝复染以胼cal质结合使用筛选元件的这些性质，细胞核的DAPI和细胞结构用细胞壁的最终染色显示为calcofluor白色。 必须注意的是，按照本协议，这些部分至关重要的是使用明胶平坦固定在滑块上，因此盖板滑移不会移动样品部分。 该方案将适用于所有植物组织，并通过进行复染试验，提供细胞内蛋白质定位的其他证据。
免疫定位一直是用于研究蛋白质在组织内的定位的方法。 该方案不仅局限于感兴趣的蛋白质，还涉及周围组织中的分子结构。 据信成熟的筛子元素被去核并且在筛板内具有丰富的胼cal质沉积。 因此，为了代表这些生物学现象，应用了复染程序。 由于本研究中感兴趣的蛋白质也被认为是定位在质外体中，进一步的复染显示蛋白质和细胞壁的共标记。
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