| Generation and Selection of Transgenic Olive Plants
|
|
Author:
Date:
2017-11-20
[Abstract] Olive (Olea europaea L.) is one of the most important oil crops in the Mediterranean basin. Biotechnological improvement of this species is hampered by the recalcitrant nature of olive tissue to regenerate in vitro. In previous investigations, our group has developed a reliable Agrobacterium-mediated transformation protocol using olive somatic embryos as explants (Torreblanca et al., 2010). Embryogenic cultures derived from radicles of matured zygotic embryos are infected with Agrobacterium tumefaciens, AGL1 strain, containing a binary plasmid with ...
[摘要] 橄榄油（Olea europaea L.）是地中海盆地最重要的石油作物之一。生物技术的改善受到橄榄组织在体外再生的顽固性质的阻碍。在以前的研究中，我们小组开发了一个可靠的土壤杆菌介导的转化方案，使用橄榄体细胞胚作为外植体（Torreblanca et al。，2010）。含有具有感兴趣基因和nptII选择基因的二元质粒的根瘤农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）AGL1菌株感染源自成熟合子胚胎胚根的胚性培养物。经过细致的选择程序，使用补充巴龙霉素的固体和液体培养基进行，建立推定的转化系。其转基因性质的初步确认是通过PCR扩增进行的。之后，可以通过有效的再生方案获得植物，其主要特征是使用低离子强度的矿物制剂，在液体培养基中用于培养物同步的阶段以及使用半渗透性乙酸纤维素膜进行胚胎成熟（Cerezo et al。 ，2011）。转基因插入的最终确认通过Southern或Northern分析使用再生植物的叶样品进行。
【背景】由Torreblanca等人开发的协议。 （2010）与Rugini等人（2000）开发的先前的橄榄转化协议有所不同，主要是外植体的种类，土壤杆菌菌株及其选择方法。 Rugini等人（2000）使用胚性质量作为外植体，将其在LBA4404农杆菌菌株的细菌悬浮液中温育48小时。感染后，将外植体在水中漂洗并在补充有250mg ...
|
|
|
| Analyses of Root-secreted Acid Phosphatase Activity in Arabidopsis
|
|
Author:
Date:
2017-04-05
[Abstract] Induction and secretion of acid phosphatase (APase) is a universal adaptive response of higher plants to low-phosphate stress (Tran et al., 2010). The intracellular APases are likely involved in the remobilization and recycling of phosphate (Pi) from intracellular Pi reserves, whereas the extracellular or secreted APases are believed to release Pi from organophosphate compounds in the rhizosphere. The phosphate starvation-induced secreted APases can be released into the rhizosphere or retained on root surfaces (root-associated APases). In this article, we describe the protocols for ...
[摘要] 酸性磷酸酶（APase）的诱导和分泌是高等植物对低磷酸盐胁迫的普遍适应性反应（Tran et al。，2010）。细胞内APase可能参与磷酸盐（Pi）从细胞内Pi储备的再利用和再循环，而细胞外或分泌的APase被认为从根际中的有机磷酸盐化合物中释放出Pi。磷酸盐饥饿诱导的分泌的APase可以释放到根际中或保留在根表面（根相关的APase）上。在本文中，我们描述了在拟南芥（Arabidopsis thaliana）（拟南芥）中分析根分泌的APase活性的方案。在拟南芥中，释放到根际的根系相关APase和APase的活性可以基于它们切割合成底物，释放黄色产物的对硝基苯基磷酸（pNPP）的能力来定量，对硝基苯酚（pNP）（Wang等，2011和2104）。根系相关的APase活性也可以通过将显色底物5-溴-4-氯-3-吲哚基 - 磷酸酯（BCIP）施用到根表面来直接显现（Lloyd等人，2001; Tomscha et al。 ，2004; Wang等人，2011和2014），而释放到根际中的APase的同功酶可以使用凝胶内测定法（Trull和Deikman，1998; Tomscha等人，2004; Wang等人， 2011年和2014年）。之前已经描述了用于分析拟南芥细胞内APase活性的方案（Vicki和William，2013）。
【背景】磷酸盐（Pi）是植物通过根系发生磷的主要形式，大多数土壤中的Pi水平较低，导致Pi饿。为了应对这种营养压力，植物引发了一系列适应性反应，增加了其生存和增长。 ...
|
|
|