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Date:
2017-04-05
[Abstract] Fertilization calcium waves are a conserved trigger for animal development; however, genetic analysis of these waves has been limited due to the difficulty of imaging in vivo fertilization. Here we describe a protocol to image calcium dynamics during in vivo fertilization in the genetic animal model Caenorhabditis elegans. This protocol consists of germline microinjection of a chemical calcium indicator, worm immobilization, live imaging, and image processing that quantifies the calcium fluorescence in the oocyte region moving in the field-of-view during ovulation. ...
[摘要] 受精钙波是动物发育的保守触发因素; 然而，这些波的遗传分析由于在体内成像难以受精而受到限制。 在这里，我们描述了在遗传动物模型秀丽隐杆线虫中的体内受精期间成像钙动力学的方案。 该方案包括化学钙指示剂的种系显微注射，蠕虫固定，活体成像和图像处理，其量化在排卵期间在视野内移动的卵母细胞区域中的钙荧光。 该成像方案也可以用于在体内受精期间对其他细胞过程进行成像。 线虫，如膜融合和细胞骨架动力学。
受精钙波在卵活化中起关键作用，并通过使用体外施肥系统在各种生物体中进行了分析。 线虫秀丽隐杆线虫由于其半透明的身体，适合于在体内成像受精。 受精钙成像在C. 塞缪尔等人报道了使用化学钙指示剂的线虫。 （2001）。 我们在这里描述了通过应用高速旋转盘共焦显微镜和图像处理方法从成像方法修改的方案，其在排卵期间分割在视场中移动的受精卵母细胞区域。 该协议能够精确定量描述钙波的时间动力学和波形图的遗传分析。
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