| Peroxisome Motility Measurement and Quantification Assay
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Author:
Date:
2017-09-05
[Abstract] Organelle movement, distribution and interaction contribute to the organisation of the eukaryotic cell. Peroxisomes are multifunctional organelles which contribute to cellular lipid metabolism and ROS homeostasis. They distribute uniformly in mammalian cells and move along microtubules via kinesin and dynein motors. Their metabolic cooperation with mitochondria and the endoplasmic reticulum (ER) is essential for the β-oxidation of fatty acids and the synthesis of myelin lipids and polyunsaturated fatty acids. A key assay to assess peroxisome motility in mammalian cells is the expression of a ...
[摘要] 细胞器运动，分布和相互作用有助于真核细胞的组织。过氧化物酶体是有助于细胞脂质代谢和ROS稳态的多功能细胞器。它们在哺乳动物细胞中均匀分布，并通过驱动蛋白和动力蛋白电动机沿微管移动。他们与线粒体和内质网（ER）的代谢合作对脂肪酸的β-氧化和髓鞘脂质和多不饱和脂肪酸的合成至关重要。评估哺乳动物细胞中过氧化物酶体运动性的关键测定是具有过氧化物酶体靶向信号（例如GFP-PTS1）的荧光融合蛋白的表达，其靶向过氧化物酶体基质并允许过氧化物酶体的活细胞成像。在这里，我们首先提出了用过氧化物酶体标记物EGFP-SKL转染培养的哺乳动物细胞的方案，以观察活细胞中的过氧化物酶体。这种方法揭示了过氧化物酶体的不同运动行为和对过氧化物酶体膜动力学的新见解（Rapp等，1996; Wiemer等，1997; ...
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| In vivo Live Imaging of Calcium Waves and Other Cellular Processes during Fertilization in Caenorhabditis elegans
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Author:
Date:
2017-04-05
[Abstract] Fertilization calcium waves are a conserved trigger for animal development; however, genetic analysis of these waves has been limited due to the difficulty of imaging in vivo fertilization. Here we describe a protocol to image calcium dynamics during in vivo fertilization in the genetic animal model Caenorhabditis elegans. This protocol consists of germline microinjection of a chemical calcium indicator, worm immobilization, live imaging, and image processing that quantifies the calcium fluorescence in the oocyte region moving in the field-of-view during ovulation. ...
[摘要] 受精钙波是动物发育的保守触发因素; 然而，这些波的遗传分析由于在体内成像难以受精而受到限制。 在这里，我们描述了在遗传动物模型秀丽隐杆线虫中的体内受精期间成像钙动力学的方案。 该方案包括化学钙指示剂的种系显微注射，蠕虫固定，活体成像和图像处理，其量化在排卵期间在视野内移动的卵母细胞区域中的钙荧光。 该成像方案也可以用于在体内受精期间对其他细胞过程进行成像。 线虫，如膜融合和细胞骨架动力学。
受精钙波在卵活化中起关键作用，并通过使用体外施肥系统在各种生物体中进行了分析。 线虫秀丽隐杆线虫由于其半透明的身体，适合于在体内成像受精。 受精钙成像在C. 塞缪尔等人报道了使用化学钙指示剂的线虫。 （2001）。 我们在这里描述了通过应用高速旋转盘共焦显微镜和图像处理方法从成像方法修改的方案，其在排卵期间分割在视场中移动的受精卵母细胞区域。 该协议能够精确定量描述钙波的时间动力学和波形图的遗传分析。
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