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Author:
Date:
2018-06-20
[Abstract] Small heat shock proteins (sHSP) are stress proteins which are ubiquitously found in almost all living organisms. They function as molecular chaperones, which assist in protein folding during translation and in the prevention of irreversible protein aggregation under denaturing conditions. This protocol describes the use of α-amylase as target protein in assessing the chaperone activity of wild and mutant recombinant small heat shock proteins of Mycobacterium leprae. Chaperone activity of these proteins, along with α-crystallin, a standard sHSP was demonstrated using a new method ...
[摘要] 小热休克蛋白（sHSP）是在几乎所有生物体中无处不在发现的应激蛋白。 它们作为分子伴侣起作用，这有助于在翻译过程中蛋白质折叠以及在变性条件下预防不可逆的蛋白质聚集。 该协议描述了使用α-淀粉酶作为靶蛋白来评估麻风分枝杆菌的野生和突变重组小热休克蛋白的分子伴侣活性。 这些蛋白质的陪伴分子活性以及标准sHSP的α-晶状体蛋白通过采用其对猪胰α-淀粉酶的热变性的保护作用的新方法被证实。 在用碘 - 碘化钾（I 2 -KI）溶液染色的淀粉琼脂平板上证实α-淀粉酶的重新酶活性。
【背景】热休克蛋白（HSPs）是一组保守的蛋白质，当细胞暴露于外部应激（包括热应激和冷应激）时诱导蛋白质。该组中的大多数成员在功能上与蛋白质折叠和解折叠机制有关。小热休克蛋白（sHSPs）是热休克蛋白的子集，其分子大小为12至43kDa，并且保守的C末端区域称为'α-晶域'。 sHSP通过与部分未折叠的蛋白结合并阻止其完全变性而显示ATP非依赖性分子伴侣活性。有几种用于证明sHSPs的体外伴侣蛋白活性的方法，其使用各种底物蛋白如RuBisCO（Goloubinoff等人，1989），rhodanese（Mendoza等人（Farahbakhsh等，1995），溶菌酶（Rozema和Gellman，1996），苹果酸脱氢酶（Lee等， ...
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Author:
Date:
2017-04-05
[Abstract] The Actin-Related Protein 2/3 (ARP2/3) complex is an actin nucleator that generates a branched actin network in mammalian cells. In addition to binding nucleation promoting factors, LeClaire et al. demonstrated that its phosphorylation state is essential key for its activity (LeClaire et al., 2008). In cells, the ARP2/3 complex is phosphorylated on threonine and tyrosine residues of the ARP2, ARP3, and ARPC1 subunits (Vadlamudi et al., 2004; LeClaire et al., 2008; Narayanan et al., 2011; LeClaire et al., 2015). In particular, ...
[摘要] 肌动蛋白相关蛋白2/3（ARP2 / 3）复合物是在哺乳动物细胞中产生支链肌动蛋白网络的肌动蛋白成核剂。除了结合成核促进因子之外，LeClaire等人。证明其磷酸化状态是其活性的关键（LeClaire等人，2008）。在细胞中，ARP2 / 3复合物在ARP2，ARP3和ARPC1亚基的苏氨酸和酪氨酸残基上磷酸化（Vadlamudi等人，2004; LeClaire等人）。 ，2008; Narayanan等人，2011; LeClaire等人，2015）。特别地，ARP2亚基的苏氨酸237和238的磷酸化对于允许将ARP2 / 3复合物结构改变为其活性构象是必要的（Narayanan等人，2011; LeClaire等人al ，2015）。虽然对于真核细胞中的许多功能很重要，但ARP2 / 3复合物活性也有利于多种细胞病原体（Haglund和Welch，2011; Welch和Way，2013）。最近，我们证明细菌病原体，嗜肺军团菌，使用注射在宿主细胞质细胞中的细菌蛋白激酶来操纵ARP2 / 3复合磷酸化状态（Michard等人，2015） ）。在这里，我们描述如何测试细菌蛋白激酶或另一种蛋白激酶在体外上下文中磷酸化ARP2 / 3复合物的能力。首先，产生和纯化ARP2 / 3复合物和细菌蛋白激酶。然后，将纯化的蛋白质在ATP存在下培养，并通过Western印迹分析ARP2 / ...
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