| Biochemical Isolation of Myonuclei from Mouse Skeletal Muscle Tissue
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Author:
Date:
2017-12-20
[Abstract] Skeletal muscle provides the contractile force necessary for movement, swallowing, and breathing and, consequently, is necessary for survival. Skeletal muscle cells are unique in that they are extremely large cells containing thousands of nuclei. These nuclei must all work in concert to maintain skeletal muscle function and thereby maintain life. The nucleus is a major site of signaling integration and gene expression regulation. However, examining nuclear processes in skeletal muscle can be difficult because myonuclei are challenging to isolate. We optimized a protocol to purify myonuclei ...
[摘要] 骨骼肌提供运动，吞咽和呼吸所需的收缩力，因此是生存所必需的。骨骼肌细胞是独特的，因为它们是含有数千个核的极大细胞。这些细胞核必须协调一致才能维持骨骼肌功能，从而维持生命。细胞核是信号整合和基因表达调控的主要部位。然而，检查骨骼肌中的核过程可能是困难的，因为肌核难以分离。我们优化了一个协议，从整个肌肉组织使用超速离心蔗糖梯度来分离核分数的纯化肌细胞。我们将这些纯化的细胞核用于下游应用，包括流式细胞术和质谱。我们使用这种方法来比较年轻和老鼠后肢肌肉的肌细胞蛋白质组（Cutler等人，2017）。这个协议可能适用于分离myonuclei的各种下游分析，如流式细胞仪，显微镜，蛋白质印迹和蛋白质组学。
【背景】为了生存，必须保持适当的骨骼肌功能。这种维持的一个组成部分是根据细胞需要和环境线索调整基因表达。调节基因表达的核过程是调节细胞组成和行为的关键组成部分。然而，由于四个技术限制，涉及这些过程的肌细胞蛋白难以研究。首先，骨骼肌是致密的，紧密地填满了组织中超过60％的蛋白质的收缩性蛋白质（Deshmukh等人，2015; Cutler等人）。 ...
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| Notch Ligand Binding Assay Using Flow Cytometry
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Author:
Date:
2017-12-05
[Abstract] Notch signaling is an evolutionarily conserved signaling pathway that plays an indispensable role during development, and in the maintenance of homeostatic processes, in a wide variety of tissues (Kopan, 2012; Hori et al., 2013). The multifaceted roles of Notch signaling are stringently regulated at different levels. One of the most important aspects of regulation is the binding of different Notch ligands to each Notch receptor (NOTCH1-NOTCH4). Canonical ligands Delta or Serrate (in Drosophila), and Delta-like (DLL1 and DLL4) or Jagged (JAG1 and JAG2) (in mammals), are ...
[摘要] Notch信号传导是进化上保守的信号传导途径，在发育过程中以及在各种组织中维持体内平衡过程中起着不可或缺的作用（Kopan，2012; Hori等人，2013）。 Notch信号的多方面作用在不同的层面上受到严格的调控。监管的最重要的方面之一是不同Notch配体与各Notch受体（NOTCH1-NOTCH4）的结合。典型的配体Delta或Serrate（在果蝇中）和Delta样（DLL1和DLL4）或Jagged（JAG1和JAG2）（在哺乳动物中）是跨膜糖蛋白。在一个细胞上表达的配体结合相邻细胞上的Notch受体以诱导Notch信号传导。通过O-岩藻糖和O-GlcNAc聚糖对Notch受体细胞外结构域的糖基化作为Notch信号强度的关键调节剂已经得到很好的确立（Stanley and Okajima，2010; Haltom and Jafar-Nejad，2015; Sawaguchi et al。 >，2017）。为了表征Notch配体与分离细胞中的Notch受体的结合，我们利用人Fc区在C端标记的Notch配体胞外结构域，并通过流式细胞术确定荧光抗Fc抗体的结合。
【背景】众所周知，细胞增殖，分化和凋亡受Notch信号调节。 ...
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