| Ex vivo Analysis of Lipolysis in Human Subcutaneous Adipose Tissue Explants
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Author:
Date:
2018-02-05
[Abstract] Most studies of human adipose tissue (AT) metabolism and functionality have been performed in vitro on isolated mature adipocyte or in situ using the microdialysis technique (Lafontan, 2012). However, these approaches have several limitations. The use of mature isolated adipocytes is limiting as adipocytes are not in their physiological environment and the collagenase digestion process could affect both adipocyte survival and functionality. While metabolic studies using microdialysis have brought the advantage of studying the lipolytic response of the adipose tissue in situ ...
[摘要] 人脂肪组织（AT）代谢的上havebeen执行的大多数研究和功能的体外上分离的脂肪细胞成熟或原位使用微透析技术（Lafontan，2012）。但是，这些方法有几个限制。成熟的分离的脂肪细胞的使用是有限的，因为脂肪细胞不在其生理环境中，胶原酶消化过程可能影响脂肪细胞的存活和功能。虽然微透析代谢研究带来了学习原位脂肪组织中的的脂肪分解反应的优点的它仅提供定性的措施，但并没有给出不同的脂肪组织细胞成分的贡献的任何信息。此外，可以在受试者中同时使用的微透析探针的数量是有限的，并且可以受到局部血流量变化和微透析样品的分子大小截断的影响。在这里，我们提出了一个协议，以评估对脂肪组织的功能的体外在AT植允许脂肪组织的研究中其整个范围内，几个小时。此外，可以评估脂肪分解的细胞特异性影响。直接在脂肪组织基质血管室。在脂肪组织中（Gao等人，2016）。
【背景】人类白色脂肪组织（WAT）在体内能量平衡中起主要作用。脂肪细胞是表达特异性脂质处理代谢活动的特化细胞，构成超过90％的WAT体积（Lafontan，2012）。除了脂肪细胞，其他细胞类型是人类WAT中存在的例如，血管细胞，免疫细胞（淋巴细胞和巨噬细胞）和祖细胞在WAT重构和更新参与。脂肪细胞的代谢活动受到局部和全身途径整合的严格控制。在合成代谢或分解代谢条件影响调制的净脂肪细胞的代谢活性神经体液信号， I.E. ...
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| Fluorescent Measurement of Synaptic Activity Using FM Dyes in Dissociated Hippocampal Cultured Neurons
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Author:
Date:
2018-01-20
[Abstract] Release and recycling of synaptic vesicles are essential for neurotransmission and synaptic plasticity. To gain mechanistic understanding of these processes, direct measurements of vesicle release and retrieval is indispensable. Styryl dyes like FM1-43 and FM4-64 have been widely used for this purpose and their loading and unloading are reliable measurements for synaptic vesicle release and retrieval in cultured neurons. This protocol describes in detail the procedure of using styryl dyes to label and measure synaptic vesicle uptake and release in cultured rat hippocampal neurons. We also ...
[摘要] 突触小泡的释放和再循环对于神经传递和突触可塑性是至关重要的。 为了获得对这些过程的机械理解，直接测量囊泡释放和回收是必不可少的。 苯乙烯基染料如FM1-43和FM4-64已被广泛用于此目的，其装载和卸载是可靠的测量突触小泡释放和恢复培养的神经元。 该协议详细描述了使用苯乙烯基染料来标记和测量培养的大鼠海马神经元中的突触小泡摄取和释放的程序。 我们还包括对海马文化的简要描述。 最后，我们简要讨论FM染料，pH敏感荧光蛋白和量子点在测量突触小泡行为方面的共性和差异。
【背景】突触小泡是神经传递不可或缺的，因为它们是化学突触中负责神经递质释放的唯一细胞器。它们的数量，释放概率，融合动力学和再循环路线定义了突触传递和神经元交流。已经开发了多种用于探测突触囊泡的工具，包括突触后神经元的电生理学记录，膜运输的电容测量，可氧化的发射体的电流分析，固定突触的电子显微镜成像以及活神经元中的囊泡标记的荧光成像。在所有现有的方法中，最后一个是不仅产生关于个体突触的空间和时间信息，而且提供高吞吐量（即，来自不同神经元的单个突触的更多数据点）的唯一方法。已经开发了基于不同定向和报告机制的各种荧光探针。二十多年前发明的苯乙烯基染料（即FM染料，包括FM1-43，FM4-64，FM5-95）仍然是一种可靠而方便的工具。由于其对脂质膜的中等亲和力及其对脂质敏感的排放，可以容易地装载到再循环的突触囊泡中并且当这些囊泡被胞吐出时释放。使用更敏感的光电探测器如EMCCD，FM染料可以报告单个囊泡释放事件。在这里，我们提供了一个相对完整的基于FM的啮齿动物海马神经元原代培养的突触小泡释放成像的描述。此外，我们还讨论了FM染料和其他荧光泡标签的共性和区别。 ...
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| Lipidomic Analysis of Caenorhabditis elegans Embryos
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Author:
Date:
2017-09-20
[Abstract] Metabolomic is an emerging field of system biology. Lipidomic, a branch of metabolomic, aims to characterize lipophilic metabolites in biological systems. Caenorhabditis elegans (C. elegans) is a genetically tractable and versatile animal model for novel discovery of lipid metabolism. In addition, C. elegans embryo is simple and homogeneous. Here, we demonstrate detailed procedures of C. elegans culture, embryo isolation, lipid extraction and metabolomic data analysis.
[摘要] 在心肌梗死（MI）中，许多心肌细胞凋亡。 这些凋亡心肌细胞被吞噬细胞迅速吞噬。 如果死细胞没有被吞没，其有害物质被释放到外面，导致炎症的诱导。 因此，需要去除这些死细胞。 然而，每个吞噬细胞类型对梗塞心脏中凋亡细胞的去除的贡献仍未解决。 在这里，我们描述了吞噬作用测定的体外方案来比较心脏巨噬细胞和心脏肌成纤维细胞的吞噬能力。
【背景】长期以来一直认为，心脏巨噬细胞消除了在失败的心脏中产生的凋亡细胞。 然而，我们发现负责组织纤维化的心脏肌成纤维细胞也具有在MI后吞噬凋亡细胞的能力（Nakaya等，2017）。 这一发现促使我们比较心脏巨噬细胞和心脏肌成纤维细胞的吞噬能力。 在这里，我们提供了一个详细的体外吞噬试验方案来评估吞噬吞噬的程度。
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