| Measurement of Intracellular ROS in Caenorhabditis elegans Using 2’,7’-Dichlorodihydrofluorescein Diacetate
|
|
Author:
Date:
2018-03-20
[Abstract] Reactive oxygen species (ROS) are generated during normal metabolic processes under aerobic conditions. Since ROS production initiates harmful radical chain reactions on cellular macromolecules, including lipid peroxidation, DNA mutation, and protein denaturation, it has been implicated in a wide spectrum of diseases such as cancer, cardiovascular disease, ischemia-reperfusion and aging. Over the past several decades, antioxidants have received explosive attention regarding their protective potential against these deleterious reactions. Accordingly, many analytical methodologies have been ...
[摘要] 在有氧条件下的正常代谢过程中产生活性氧物质（ROS）。 由于ROS产生会引起细胞大分子的有害自由基连锁反应，包括脂质过氧化反应，DNA突变和蛋白质变性，因此它已涉及多种疾病，如癌症，心血管疾病，缺血再灌注和衰老。 在过去的几十年中，抗氧化剂已经受到爆炸性的关注，因为它们对这些有害反应具有保护作用。 因此，已经开发了许多分析方法用于评估化合物或复杂生物样品的抗氧化能力。 在此，我们介绍了使用2'，7'-二氯荧光素二乙酸盐（H 2），在线虫体内用光度计检测体内细胞内ROS水平的简单方便的方法。 DCFDA），一种细胞渗透性示踪剂。
【背景】已经广泛地使用荧光探针2'，7'-二氯荧光素二乙酸酯（H 2 DCFDA）原位检测活体内细胞内活性氧簇（ROS）水平由在氧化应激和相关疾病领域工作的研究人员提供。非极性和非离子型探针H 2 DCFDA可以容易地穿透细胞膜并且被酯酶酶促脱乙酰化。该生物化学反应将H 2 DCFDA转化成非荧光化合物H 2 DCF，然后将其迅速氧化成高度荧光的2'，7'-二氯荧光素（DCF） ROS的存在（图1A）。因此，来自H 2 ...
|
|
|
| Preparation of Onion Epidermal Cell Walls for Imaging by Atomic Force Microscopy (AFM)
|
|
Author:
Date:
2017-12-20
[Abstract] The growing plant cell wall is comprised of long, thin cellulose microfibrils embedded in a hydrated matrix of polysaccharides and glycoproteins. These components are typically constructed in layers (lamellae) on the inner surface of the cell wall, i.e., between the existing wall and the plasma membrane. The organization of these components is an important feature for plant cell growth and mechanics. To directly visualize the nano-scale structure of the newly-deposited surface of primary plant cell walls without dehydration or chemical extraction, a protocol of cell wall preparation ...
[摘要] 生长的植物细胞壁由嵌入多糖和糖蛋白的水合基质中的长而薄的纤维素微原纤维组成。这些组分通常在细胞壁的内表面（即现有的壁与质膜之间）中以层（薄层）构建。这些成分的组织是植物细胞生长和力学的重要特征。为了直接观察原始植物细胞壁的新沉积表面的纳米级结构而不脱水或化学提取，开发了用于原子力显微镜成像的细胞壁制备方案，最近在水溶液中合成了细胞壁表面。虽然该方法是为洋葱鳞片表皮制定的，但它也可以适用于其他器官，如拟南芥胚轴，以及来自叶柄或下胚轴的细胞壁的研磨样品。拟南芥和黄瓜，玉米胚芽鞘和洋葱薄壁组织。还讨论了植物细胞壁的AFM成像的潜在伪影。
【背景】原生植物细胞壁的结构在确定细胞壁生物力学性质和调节植物细胞生长和形态发生方面起着关键作用（Cosgrove，2005和2016）。为了显现细胞壁组织，常用方法包括透射和扫描电子显微镜（TEM，SEM），光学显微镜和AFM（McCann等人，1990; Marga等人， ，2005; Anderson等人，2010; Ding等人，2012; Abraham和Elbaum，2013; Zhang等人，，2014 ; ...
|
|
|
| Biomechanical Characterization of Onion Epidermal Cell Walls
|
|
Author:
Date:
2017-12-20
[Abstract] Here we describe two experimental protocols to measure the biomechanical properties of primary (growing) plant cell walls, with a focus on analyzing cell wall epidermal strips of onion scales. The first protocol measures cell wall creep (time-dependent irreversible extension) under constant force. Such creep is often mediated by the wall-loosening action of expansin or selective endoglucanases. The second protocol is based on two consecutive stretches of the wall and measures the wall’s elastic and plastic compliances, which depend on cell wall structure. These two assays provide ...
[摘要] 在这里，我们描述了两个实验协议来衡量的主要（成长）植物细胞壁的生物力学性能，重点是分析洋葱鳞片的细胞壁表皮带。 第一个协议测量细胞壁蠕变（时间依赖的不可逆扩展）在恒定的力量下。 这种蠕变通常由膨胀素或选择性内切葡聚糖酶的壁松弛作用介导。 第二种方案是基于两个连续的壁延伸并测量壁的弹性和塑性顺从性，这取决于细胞壁结构。 这两个测定提供了可能与细胞壁结构和细胞膨胀生长相关的补充信息。
【背景】生长的植物细胞的主壁足够强以抵抗由细胞膨压产生的张力，但由于扩展蛋白或其它不可逆细胞壁增大所必需的催化剂的选择性松动作用，细胞生长期间可能不可逆地膨胀（Cosgrove， 2016a和2016b）。细胞壁力学性质（如弹性和可塑性）的评估对于理解细胞壁结构及其在生长（细胞增大）和生长停止后的改变是重要的。墙体力学的一个重要测量方法是基于单轴拉伸试验，如我们在测量弹性和塑性柔量（柔量是模量的倒数;模量是刚度的度量）的应力/应变试验中所述。另一种互补测定法是基于不可逆的，随时间增长的长度（蠕变），其在原始细胞壁中发生，当它们保持恒定的张力并且被内源性膨胀素或外源内切葡聚糖酶持续松弛时（Durachko和Cosgrove，2009; Cosgrove ，2011; ...
|
|
|