| Mouse Model of Immune Complex-mediated Vasculitis in Dorsal Skin and Assessment of the Neutrophil-mediated Tissue Damage
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Author:
Date:
2017-12-20
[Abstract] Neutrophils are the most abundant leukocytes in the blood. In the recent decades, their crucial roles in host defense, immune regulation and tissue damage have been studied in a deeper dimension. In this protocol, we described a mouse model of immune complex-mediated vasculitis in the dorsal skin induced by Arthus reaction, and the subsequent analysis of edema, hemorrhage and tissue damage due to neutrophil activation by means of Evans blue area analysis, histology, and immunofluorescence. This protocol could facilitate the investigation of cellular therapy strategy against over-activated ...
[摘要] 嗜中性粒细胞是血液中最丰富的白细胞。 近几十年来，它们在宿主防御，免疫调节和组织损伤方面的关键作用已经得到了更深入的研究。 在这个协议中，我们描述了Arthus反应诱导的背部皮肤中的免疫复合物介导的血管炎的小鼠模型，以及随后通过伊文思蓝区域分析，组织学和分析由于嗜中性粒细胞活化引起的水肿，出血和组织损伤免疫荧光。 该协议可以促进细胞治疗策略对过度活化的嗜中性粒细胞介导的组织损伤的调查。
【背景】嗜中性粒细胞构成循环白细胞的最大的进化保守部分。他们引导第一波主机防御感染或组织损伤。嗜中性粒细胞介导的细胞毒性的体外模型已被充分证实（Incani等人，1981; Dallegri等人，1984; Saffarzadeh等人，等人，2012年）。但是，为了剖析中性粒细胞介导的无菌组织损伤的复杂性，“体内”模型是必不可少的。
免疫复合物（IC）介导的血管炎是由抗原 - 抗体复合物在血管中沉积引发的疾病，其随后导致补体激活，嗜中性粒细胞募集和活化。活化的嗜中性粒细胞释放的大量活性氧和蛋白酶损害血管壁的内皮衬里并导致水肿和出血（Sindrilaru等人，2007; Goerge等人， ，2008; ...
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| In vitro Demonstration and Quantification of Neutrophil Extracellular Trap Formation
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Author:
Date:
2017-07-05
[Abstract] In the recent decade, neutrophil extracellular traps (NETs) have been identified and confirmed as a new anti-microbial weapon of neutrophils. In this protocol, we describe easy methods to demonstrate NET formation by immunofluorescence staining of extracellular chromatin fiber with anti-DNA/Histone H1 antibody and quantification of NETs by using a non-cell-permeable DNA specific dye Sytox orange.
[摘要] 近十年来，嗜中性粒细胞胞外捕获物（NETs）已被鉴定并确认为一种新的抗微生物中性粒细胞武器。 在该方案中，我们描述了通过使用抗DNA /组蛋白H1抗体的细胞外染色质纤维的免疫荧光染色和通过使用非细胞可渗透的DNA特异性染料Sytox orange来定量NETs的简便方法来证明NET形成。
【背景】嗜中性粒细胞构成循环白细胞中最大的进化保守部分。他们通过各种机制建立了针对病原体的第一道防线，包括形成嗜中性粒细胞胞外捕获物（NETs）。在此过程中，活化的嗜中性粒细胞从细胞核中排出染色质纤维。入侵的病原体然后被捕获在染色质网络内并被高度浓缩的NET缠结的抗微生物蛋白如髓过氧化物酶（MPO）和弹性蛋白酶（Brinkmann等人，2004）杀死。然而，NETs是一把双刃剑;来自过度活化的嗜中性粒细胞的无限制的NET形成也可能导致严重的组织损伤，例如通过NET的组蛋白组分的细胞毒性作用（Saffarzadeh等人，2012）。中性粒细胞过度活化并具有增强的形成NETs的能力的病理状况的一个例子是系统性红斑狼疮。狼疮患者血清中针对双链DNA及其它组分的抗体水平升高（Knight and Kaplan，2012; Yu and ...
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| In vitro Detection of Neutrophil Traps and Post-attack Cell Wall Changes in Candida Hyphae
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Author:
Date:
2017-04-05
[Abstract] In this protocol we describe how to visualize neutrophil extracellular traps (NETs) and fungal cell wall changes in the context of the coculture of mouse neutrophils with fungal hyphae of Candida albicans. These protocols are easily adjusted to test a wide array of hypotheses related to the impact of immune cells on fungi and the cell wall, making them promising tools for exploring host-pathogen interactions during fungal infection.
[摘要] 在本协议中，我们描述了如何在小鼠嗜中性粒细胞与真菌白色念珠菌的真菌菌丝共培养的背景下观察嗜中性粒细胞胞外捕获物（NETs）和真菌细胞壁变化。 这些方案很容易调整，以测试与免疫细胞对真菌和细胞壁的影响有关的各种假设，使其成为探索真菌感染期间宿主病原体相互作用的有前景的工具。
C。白色念珠菌是一种多态性机会性酵母，嗜中性粒细胞是免疫细胞，对于这种和其他真菌病原体的防御至关重要（Brown等，2012; Lionakis和Netea，2013）。 NETs是可以针对病原体部署的潜在防御机制，并且已经表明它们优先针对诸如C的微生物细胞部署。白念珠菌菌丝太大而不能吞噬（Urban et al。，2006; Bruns等人，2010; Branzk等人，，2014; Rohm等人，2014）。 NET已经显示含有许多组分，包括髓过氧化物酶，胞外DNA和瓜氨酸化的组蛋白（Amulic等人，2012; ...
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