| Equilibrium and Kinetic Measurements of Ligand Binding to HiBiT-tagged GPCRs on the Surface of Living Cells
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Author:
Date:
2020-12-20
[Abstract] G-protein coupled receptors (GPCRs) remain at the forefront of drug discovery efforts. Detailed assessment of features contributing to GPCR ligand engagement in a physiologically relevant environment is imperative to the development of new therapeutics with improved efficacy. Traditionally, binding properties such as affinity and kinetics were obtained using biochemical radioligand binding assays. More recently, the high specificity of resonance energy transfer has been leveraged toward the development of homogeneous cell-based proximity assays with capacity for real-time kinetic ...
[摘要] [摘要] G蛋白偶联受体（GPCR）仍然是药物发现工作的最前沿。对有助于GPCR配体参与生理相关环境的特征进行详细评估，对于开发具有更高功效的新疗法至关重要。传统上，使用生化放射性配体结合测定法获得结合特性，如亲和力和动力学。最近，共振能量转移的高特异性已利用向homogen发展Ë容量进行实时动态测量的OU基于细胞的邻近分析。这套配体结合方案将生物发光共振能量转移（BRET）的特异性与发光HiBiT肽提供的灵敏度相结合。BRET格式用于通过与荧光示踪剂的竞争性结合来定量配体与其同源HiBiT标签GPCR之间的动态相互作用。同时，HiBiT与细胞不可渗透的LgBiT的高亲和力互补将明亮的生物发光供体信号限制到细胞表面，并消除了细胞内区室中未被占用的受体的发光背景。
[背景] G蛋白偶联受体（GPCR）在驱动细胞信号传导途径中起关键作用，并且仍然是药物开发的重要目标类别（Santos等，2017）。因此，对于基础研究和药物发现运动而言，可以定量对于药物作用至关重要的生物物理特性的GPCR配体结合测定法是必不可少的（Fang，2012； ...
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| Isolation of Exosomes from Semen for in vitro Uptake and HIV-1 Infection Assays
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Author:
Date:
2017-04-05
[Abstract] Exosomes are membranous extracellular nanovesicles of endocytic origin. Exosomes are known to carry host and pathogen-derived genomic, proteomic, lipidomic cargos and other extraneous molecules. Exosomes are secreted by diverse cell types into the extracellular milieu and are subsequently internalized by recipient neighboring or distal cells. Upon internalization, exosomes condition recipient cells by donating their cargos and/or activating various signal transduction pathways, consequently regulating physiological and pathophysiological processes. Exosomes facilitate intercellular ...
[摘要] 外来体是内膜起源的膜性胞外纳米囊。 已知外来载体携带宿主和病原体衍生的基因组，蛋白质组，脂质体载体和其他外来分子。 外来体由不同细胞类型分泌到细胞外环境中，随后被受体相邻细胞或远端细胞内化。 在内化后，外来体通过捐赠其载体和或激活各种信号转导途径来调节受体细胞，从而调节生理和病理生理过程。 外来体促进细胞间通讯，调节细胞表型和调节微生物发病机制。 我们以前表明精液外来体（SE）抑制各种细胞类型的HIV-1复制。 在这里，我们描述特征SE的详细协议。 该方案可以适应或修改，并用于评估感兴趣的其他细胞外小泡。
外来体是由许多细胞类型的晚期内体室内的内体膜向内发生的结果而引起的膜状纳米囊（Simons and Raposo，2009）。外来体被许多细胞类型（Iglesias等人，2012）释放到细胞外环境中，并且被发现在包括血液在内的生物流体中（Kaur等人，2014）尿（Liem等人，2013）唾液（Madison等人，2015）和母乳（Madison等人，2014; Naslund ，2014）。人类精液含有由包括前列腺分泌腺泡细胞在内的男性生殖道组织产生的纳米囊泡的异质群体（Madison等人，2014; Madison等人，2015） （Sahlen等人，2002）和附睾上皮细胞（Frenette等人，2010）以及vasa感染，睾丸和囊泡腺细胞（ ...
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