| Random Insertional Mutagenesis of a Serotype 2 Dengue Virus Clone
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Author:
Date:
2018-08-20
[Abstract] Protein tagging is a powerful method of investigating protein function. However, modifying positive-strand RNA virus proteins in the context of viral infection can be particularly difficult as their compact genomes and multifunctional proteins mean even small changes can inactivate or attenuate the virus. Although targeted approaches to functionally tag viral proteins have been successful, these approaches are time consuming and inefficient. A strategy that has been successfully applied to several RNA viruses is whole-genome transposon insertional mutagenesis. A library of viral genomes, each ...
[摘要] 蛋白质标记是研究蛋白质功能的有效方法。然而，在病毒感染的情况下修饰正链RNA病毒蛋白可能特别困难，因为它们的紧密基因组和多功能蛋白意味着即使很小的变化也可以使病毒失活或减弱。尽管功能性标记病毒蛋白的靶向方法已经成功，但这些方法耗时且效率低。已经成功应用于几种RNA病毒的策略是全基因组转座子插入诱变。通过细胞培养中的传代选择病毒基因组文库，每个文库含有单个随机放置的小插入，并且可以使用下一代测序（NGS）鉴定插入位点。在这里，我们描述了用于登革病毒16681株血清型2的转座子诱变的方案。含有短随机放置插入物的突变登革病毒文库通过哺乳动物细胞传代，插入由有活力后代的NGS定位。该方案分为四个阶段：登革热cDNA克隆的转座子诱变，病毒基因组转染到允许细胞，分离病毒后代基因组和测序文库制备。
【背景】 ...
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| Isolation of Exosomes from Semen for in vitro Uptake and HIV-1 Infection Assays
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Author:
Date:
2017-04-05
[Abstract] Exosomes are membranous extracellular nanovesicles of endocytic origin. Exosomes are known to carry host and pathogen-derived genomic, proteomic, lipidomic cargos and other extraneous molecules. Exosomes are secreted by diverse cell types into the extracellular milieu and are subsequently internalized by recipient neighboring or distal cells. Upon internalization, exosomes condition recipient cells by donating their cargos and/or activating various signal transduction pathways, consequently regulating physiological and pathophysiological processes. Exosomes facilitate intercellular ...
[摘要] 外来体是内膜起源的膜性胞外纳米囊。 已知外来载体携带宿主和病原体衍生的基因组，蛋白质组，脂质体载体和其他外来分子。 外来体由不同细胞类型分泌到细胞外环境中，随后被受体相邻细胞或远端细胞内化。 在内化后，外来体通过捐赠其载体和或激活各种信号转导途径来调节受体细胞，从而调节生理和病理生理过程。 外来体促进细胞间通讯，调节细胞表型和调节微生物发病机制。 我们以前表明精液外来体（SE）抑制各种细胞类型的HIV-1复制。 在这里，我们描述特征SE的详细协议。 该方案可以适应或修改，并用于评估感兴趣的其他细胞外小泡。
外来体是由许多细胞类型的晚期内体室内的内体膜向内发生的结果而引起的膜状纳米囊（Simons and Raposo，2009）。外来体被许多细胞类型（Iglesias等人，2012）释放到细胞外环境中，并且被发现在包括血液在内的生物流体中（Kaur等人，2014）尿（Liem等人，2013）唾液（Madison等人，2015）和母乳（Madison等人，2014; Naslund ，2014）。人类精液含有由包括前列腺分泌腺泡细胞在内的男性生殖道组织产生的纳米囊泡的异质群体（Madison等人，2014; Madison等人，2015） （Sahlen等人，2002）和附睾上皮细胞（Frenette等人，2010）以及vasa感染，睾丸和囊泡腺细胞（ ...
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