| Determination of Mn Concentrations in Synechocystis sp. PCC6803 Using ICP-MS
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Author:
Date:
2017-12-05
[Abstract] Manganese (Mn) is an essential micronutrient for all photoautotrophic organisms. Two distinct pools of Mn have been identified in the cyanobacterium Synechocystis sp. PCC 6803 (Synechocystis), with 80% of the Mn residing in the periplasm and 20% in cytoplasm and thylakoid lumen (Keren et al., 2002). In this protocol, we describe a method to quantify the periplasmic and intracellular pools of Mn in Synechocystis accurately, using inductively coupled plasma mass spectrometry (ICP-MS).
[摘要] 锰（Mn）是所有光合自养生物体必需的微量营养素。 在蓝细菌集胞藻中已经鉴定了两个不同的锰库。 PCC 6803（ Synechocystis ），其中80％的Mn存在于周质中，20％存在于细胞质和类囊体腔中（Keren等，2002）。 在这个协议中，我们描述了使用电感耦合等离子体质谱法（ICP-MS）精确定量集胞藻中周质和细胞内锰库的方法。
【背景】Mn在几种酶的活性位点中起着至关重要的作用，例如光系统II中的放氧复合物。与其作为重要的微量营养素的作用相反，锰过量时可能是有毒的。因此，蓝细菌维持细胞内的Mn水平，特别是避免游离的Mn在细胞质中是至关重要的。蓝细菌集胞藻通过在周质中储存约80％的Mn来解决这一挑战。在细胞质和类囊体系统中只能检测到20％的细胞含量（Keren等，2002），大部分Mn被掺入蛋白质中，在细胞质中几乎没有游离的Mn 。我们最近鉴定了锰转运蛋白Mnx，它存在于类囊体膜中并促进Mn从细胞质输出到集胞藻的类囊体腔中。根据我们的研究，Mnx是维持细胞Mn稳态的主要参与者（Brandenburg等人，2017）。为了分析Mnx的生物学意义，我们制定了一个方案来分别测量周质和细胞内Mn池。我们选择ICP-MS进行定量分析，因为它是检测生物样品中金属的灵敏可靠的方法。检测限可以在[ng L ...
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| Phenotypic Profiling of Candida glabrata in Liquid Media
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Author:
Date:
2017-04-05
[Abstract] Here, we describe a method for a large-scale liquid screening approach in C. glabrata. This liquid media method offers several distinct advantages over solid media approaches. This includes growth measurement on a plate reader instead of comparing growth by eye-sight. Furthermore, the liquid method requires lower amounts of antifungals and offers a higher sensitivity. While this method has been optimized for C. glabrata it might be used for other Candida species and yeast-like fungi as well.
[摘要] 在这里，我们描述了一种用于大规模液体筛选方法的方法。 glabrata 。 这种液体介质方法比固体介质方法提供了几个明显的优点。 这包括平板阅读器的增长测量，而不是通过视力来比较增长。 此外，液体方法需要较少量的抗真菌剂并提供更高的灵敏度。 虽然这种方法已经针对C进行了优化。 glabrata 也可以用于其他念珠菌物种和酵母样真菌。
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