| Measurement of Energy-dependent Rhodamine 6G Efflux in Yeast Species
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Author:
Date:
2017-08-05
[Abstract] Rhodamine 6G is a highly fluorescent dye often used to determine the transport activity of yeast membrane efflux pumps. The ATP-binding cassette transporter KlPdr5p confers resistance to several unrelated drugs in Kluyveromyces lactis. KlPdr5p also extrudes rhodamine 6G (R6G) from intact yeast cells in an energy-dependent manner. Incubation of yeast cells in the presence of 2-deoxy-D-glucose (inhibitor of glycolysis) and R6G (mitochondrial ATPase inhibitor) leads to marked depletion of intracellular ATP pool (Kolaczkowski et al., 1996). An active KlPdr5p ...
[摘要] 罗丹明6G是一种高荧光染料，常用于测定酵母膜外排泵的运输活性。 ATP结合盒转运蛋白Klr5p赋予乳酸克鲁维酵酵菌中几种不相关药物的抗性。 Pdr5p还以能量依赖的方式从完整的酵母细胞中挤出罗丹明6G（R6G）。 在2-脱氧-D-葡萄糖（糖酵解抑制剂）和R6G（线粒体ATP酶抑制剂）存在下酵母细胞的孵育导致细胞内ATP池的显着消耗（Kolaczkowski等人，1996）。 从完整的酵母细胞中可以直接测量R6G的荧光的直接测量PdF5p介导的来自完整酵母细胞的R6G的挤出。
【背景】多药物外排泵广泛分布，可在所有生物种类中找到。它们代表抗菌素耐药性的重要机制。量化外排泵活性的能力对于理解其对生理过程的贡献和评估潜在治疗药物（例如，外排抑制剂）的有效性（Blair和Piddock，2016）是必要的。外排活动测量的方法主要依赖于两种不同的机制。一些方法直接测量底物流出，即，多少基质被泵出，其他方法测量细胞内的底物分子积累，其水平然后用于间接推断流出。然而，后者由于可改变膜渗透性而改变了染料流入速率（Blair和Piddock，2016）的敏感性较差。 R6G在生长中的积累。白念珠菌细胞与ABC转运蛋白念珠菌药物抗性1（CDR1 ...
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| Rapid Isolation of Total Protein from Arabidopsis Pollen
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Author:
Date:
2017-04-20
[Abstract] Arabidopsis pollen is an excellent system for answering important biological questions about the establishment and maintenance of cellular polarity and polar cell growth, because these processes are amenable to the genetic and genomic approaches that are readily available in Arabidopsis. Given that proteins are the direct executors of a wide variety of cellular processes, it is important to rapidly and efficiently isolate total protein for various protein-based analyses, such as Western blotting, co-immunoprecipitation and mass spectrometry, among others. Here we present a ...
[摘要] 拟南芥花粉是用于回答关于细胞极性和极性细胞生长的建立和维持的重要生物学问题的优秀系统，因为这些方法适用于在中容易获得的遗传和基因组方法， 拟南芥。 鉴于蛋白质是各种细胞过程的直接执行者，重要的是快速有效地分离各种基于蛋白质的分析的总蛋白质，例如Western印迹，共免疫沉淀和质谱等。 在这里，我们提出了一种从拟南芥花粉中快速分离总蛋白的方案，该方法是从我们最近发表的论文（Chang and Huang，2015）中得到改编的。
花粉是性繁殖植物生命周期的关键阶段。花粉萌发和随后的管生长提供了两个非活动精子细胞在开花植物中进行双重受精的通道。花粉通常被用作解决基本细胞生物学问题的示范系统，例如细胞极性和极细胞生长的建立和维持，以及肌动蛋白细胞骨架的结构和功能（Chen等人， ，2009; Qu等人，2015）。通常来自百合和烟草的花粉由于粒度大而被广泛使用，这使得它们在显微镜下容易收集和观察。相比之下，拟南芥花粉小，收集大量花粉以分离足够量的蛋白质以进行下游分析（如Western印迹和质谱法）相对困难。因此，开发快速分离总拟蛋白质拟南芥花粉的方案将有助于相关分析。
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