| Quantitative Electron Microscopic Assay Using Random Sampling from Single Sections to Test Plastic Synaptic Changes in Hippocampus
|
|
Author:
Date:
2018-08-05
[Abstract] Studies over several decades on the organization of the CA1 hippocampus–a particularly favorable model for learning, memory and certain forms of cognition–have shown that the synaptic network in this brain region is plastic (Fortin et al., 2012). Recent evidence suggests that a number of environmental and endogenous stimuli may have a substantial effect on hippocampus-dependent cognitive function, implying enhanced synaptic plasticity in this brain region. Stimuli (e.g., food restriction, enriched environment, social interaction, gene-loss [knock-out animals], etc.) ...
[摘要] 几十年来对CA1海马组织的研究 - 一种特别有利于学习，记忆和某些形式认知的模型 - 已经证明这个大脑区域的突触网络是可塑的（Fortin 等。 ，2012）。最近的证据表明，许多环境和内源性刺激可能对海马依赖性认知功能产生实质性影响，这意味着这个大脑区域的突触可塑性增强。刺激（例如，食物限制，丰富的环境，社会互动，基因丢失[敲除动物]，等）可以触发结构和功能的可塑性（例如，，脊柱形成，神经营养因子的表达增加，突触功能和神经发生）（Stewart et al。，1989; Andrade et al。， 2002; Babits et al。，2016）。使用定量电子显微镜，我们可以在短期或长期治疗和/或刺激期间研究啮齿动物中CA1海马的突触神经纤维。在该电子显微镜方法构建体的范围内，可以量化各种突触连接的密度，兴奋性脊柱突触的形态和内部结构（例如，突触后密度的平均长度和宽度）。使用高分辨率电子显微镜的这种定量超微结构测量可以用于观察啮齿动物脑组织中突触可塑性的结构表现。所提出的超微结构方案可以使研究人员能够揭示细节和突触变化，这些变化仅使用光学显微镜可能并不明显。超微结构数据可以为我们理解不同条件下海马突触结构的变化提供实质性进展。
【背景】我们使用单个切片的随机采样进行电子显微镜检查以优化样本大小（每个样本超过约100个图像）并检测对照和治疗动物的突触特征的变化。 ...
|
|
|
| Metal-tagging Transmission Electron Microscopy for Localisation of Tombusvirus Replication Compartments in Yeast
|
|
Author:
Date:
2018-04-20
[Abstract] Positive-stranded (+) RNA viruses are intracellular pathogens in humans, animals and plants. To build viral replicase complexes (VRCs) viruses manipulate lipid flows and reorganize subcellular membranes. Redesigned membranes concentrate viral and host factors and create an environment that facilitates the formation of VRCs within replication organelles. Therefore, efficient virus replication depends on the assembly of specialized membranes where viral macromolecular complexes are turned on and hold a variety of functions. Detailed characterization of viral replication platforms in cells ...
[摘要] 正链（+）RNA病毒是人，动物和植物中的细胞内病原体。构建病毒复制酶复合物（VRC）病毒操纵脂质流动和重组亚细胞膜。重新设计的膜集中了病毒和宿主因子，并创造了促进复制细胞器内VRC形成的环境。因此，有效的病毒复制取决于病毒大分子复合物开启并具有各种功能的特殊膜的组装。细胞中病毒复制平台的详细特征需要复杂的成像方法。在这里我们提出一个协议，用肉眼标记透射电子显微镜（METTEM）可视化酵母中的tombusvirus复制酶复合物的三维组织。该协议使我们能够用METTEM和电子断层扫描成像三维病毒复制酶分子的细胞内分布。我们的研究显示病毒复制酶分子如何在特化细胞膜内构建复制复合物。
【背景】正链RNA病毒的复制取决于细胞膜的重塑。细胞内膜作为VRC装配的结构支架，提供调节病毒复制酶活性和保护病毒RNA免受宿主抗病毒防御的必需脂质和辅因子（Miller和Krijnse-Locker，2008; den Boon <等，2010; nagy和pogany，2011;="" nagy，2016）。电子显微镜观察到具有活性vrc的复制细胞器的结构。="" vrc以单个膜囊或'小球'，管状球形立方体膜，双膜囊泡（dmv）或平面寡聚体阵列装配（de="" castro等人，2013）。通常在rna病毒感染的细胞中观察到小球。它们通过在各种细胞器中内陷而形成，并具有对胞质溶胶的狭窄开口（den="" boon="" et=""> ...
|
|
|
| Freeze-fracture-etching Electron Microscopy for Facile Analysis of Yeast Ultrastructure
|
|
Author:
Date:
2017-09-20
[Abstract] We describe a streamlined method that enables the quick observation of yeast ultrastructure by electron microscopy (EM). Yeast cells are high-pressure frozen, freeze-fractured to cut across the cytoplasm, and freeze-etched to sublimate ice in the cytosol and the organelle lumen. The cellular structures delineated by these procedures are coated by a thin layer of platinum and carbon deposited by vacuum evaporation, and this platinum–carbon layer, or replica, is observed by transmission EM. The method differs from the deep-etching of pre-extracted samples in that intact live cells are processed ...
[摘要] 我们描述了一种流线型的方法，可以通过电子显微镜（EM）快速观察酵母超微结构。 酵母细胞是高压冷冻的，冷冻破碎以跨细胞质切割，并冷冻蚀刻以升华胞质溶胶和细胞器腔内的冰。 通过这些方法描绘的细胞结构涂覆有通过真空蒸发沉积的铂和碳薄层，并且通过传输EM观察该铂 - 碳层或复制品。 该方法不同于预提取样品的深刻蚀，因为完整的活细胞在没有任何化学处理的情况下进行处理。 最突出的是观察到由不可获得的脂质酯制成的脂滴，但是可以容易地分析其他细胞器 - 细胞核，内质网，高尔基体，空泡，线粒体及其相互关系。 值得注意的是，从快速冷冻到EM观察的整个过程都可以在一天之内完成。
【背景】萌发酵母（Saccharomyces cerevisiae）可能是最常用的模型生物，应用各种各样的实验技术和复杂的全基因组数据库的存在大大促进了研究进展（Botstein和Fink，2011）。然而，由于其相对较小的尺寸和圆形，酵母的显微成像并不总是以令人满意的方式进行。细胞壁的存在对于常规电子显微镜（EM）尤其是一个问题，因为它妨碍样品制备中使用的试剂的渗透。快速冷冻酵母的冷冻替代EM目前被认为是超微结构观察的最佳方法（Giddings et al。，2001），但该方法存在缺点，即膜结构不清晰可见，有些细胞成分可能不被保留在有机溶剂中的取代过程中，该程序至少需要几天才能进行观察。
最近在固定相酵母中检查脂肪的研究中，我们使用冷冻断裂蚀刻来分析酵母超微结构（Tsuji ...
|
|
|