| Root Aliphatic Suberin Analysis Using Non-extraction or Solvent-extraction Methods
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Author:
Date:
2017-06-20
[Abstract] Here we describe both non-extraction and solvent-extraction methods for root aliphatic suberin analysis. The non-extraction method is fast as roots are directly depolymerized using acidic transmethylation. However, suberin aliphatic components are isolated together with all the other acyl chains making up the lipids (e.g., membranes) present in roots. For the solvent-extraction method, roots are first delipidated before transmethylation. This method is longer but allows separation of soluble and polymerized root lipids. This protocol is optimized for tissue culture- or soil-grown Arabidopsis ...
[摘要] 在这里我们描述了非提取和溶剂萃取方法的根脂肪族苏维林分析。 非提取方法快速，因为根使用酸性转甲基化直接解聚。 然而，苏维林脂族组分与构成根中存在的脂质（例如膜）的所有其它酰基链一起分离。 对于溶剂萃取方法，首先在转甲基化之前使根脱皮。 该方法较长，但可分离可溶性和聚合的根脂质。 该方案针对组织培养或土壤种植的拟南芥植物进行了优化，但可与其他植物的根一起使用。
【背景】Suberin是沉积在各种组织的细胞壁中的细胞外植物脂质聚合物，例如根内皮，外皮和根周围。 Suberin作为控制水和溶质通量并限制病原体感染的屏障（Ranathunge et al。，2011; Andersen等，2015; Vishwanath等，2015; Barberon等，2016）。 Suberin是由脂类，酚类和甘油组成的复杂杂聚物，与溶剂萃取蜡相关（Bernards，2002）。在拟南芥模拟植物中，苏维林聚合物主要由ω-羟基酸和α，ω-二羧酸制成，但也含有未取代的脂肪酸和伯醇脂肪醇（Domergue等，2010; Vishwanath et al。 2013），而相关的蜡是羟基肉桂酸烷基酯（AHC; Kosma等，2012; ...
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| Expression, Purification and Crystallisation of the Adenosine A2A Receptor Bound to an Engineered Mini G Protein
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Author:
Date:
2017-04-20
[Abstract] G protein-coupled receptors (GPCRs) promote cytoplasmic signalling by activating heterotrimeric G proteins in response to extracellular stimuli such as light, hormones and nucleosides. Structure determination of GPCR–G protein complexes is central to understanding the precise mechanism of signal transduction. However, these complexes are challenging targets for structural studies due to their conformationally dynamic and inherently transient nature. We recently developed an engineered G protein, mini-Gs, which addressed these problems and allowed the formation of a stable GPCR–G ...
[摘要] G蛋白偶联受体（GPCR）通过激活异源三聚体G蛋白来响应细胞外刺激如光，激素和核苷来促进细胞质信号传导。 GPCR-G蛋白复合物的结构测定对于了解信号转导的精确机制至关重要。然而，由于它们的构象动态和固有的短暂性质，这些复合物是结构研究的具有挑战性的目标。我们最近开发了一种工程化的G蛋白，微型G ，解决了这些问题，并允许形成稳定的GPCR-G蛋白复合物。 Mini-G 促进了人腺苷A 2A受体（A 2A 2A）在其G蛋白结合构象中的结构测定，在3.4 Å分辨率。在这里，我们描述了A 2A R R的表达和纯化的一步一步的方案，并且A 2AA-R-mini-G'子>复杂。
背景 我们最近开发了一种工程化的最小G蛋白，迷你G（Carpenter和Tate，2016），其促进了人腺苷A 2A受体的结构测定（A <其活性状态（carpenter等人，2016）。 mini-g="">充分稳定A 2A R的活性构象，以允许络合物在洗涤剂辛硫基葡糖苷中通过蒸气扩散结晶。在这里，我们描述了一种用于表达和纯化Aβ2A ...
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